点成分享 | 实验步骤篇之“血块中DNA的提取”

1 操作步骤

1. 取15ml的研磨器，加入血块样本后，再加入4-5ml的溶血试剂，研磨至血块消失后再研磨2-3min，然后移入到15ml离心管中；3000rpm，离心10min。

2. 离心结束后，弃去上层液后，加入8-10ml的溶血试剂，使用一次性滴管将沉淀吹打均匀；3000rpm，离心10min。

3. 待离心结束后，弃去上层液，再加入1ml溶血试剂，使用微量移液器将沉淀吹打均匀，转移至2ml的EP管中；6000rpm，离心10min。

4.  弃去上清液，加入1ml细胞裂解液，将沉淀震荡均匀后，每个离心管加入10ul的蛋白酶k(20mg/ml)，37°C恒温水浴过夜，或者是56°C水浴3小时。

5. 水浴结束后，在通风橱内，每管加入1ml(等体积）平衡酚，上下颠倒混匀50次后，6000rpm，离心10min。离心结束后，吸取上清与另一个2mlEP管（水相含有DNA，白色絮状物为蛋白）。

6. 重复步骤5

7. 吸取上清与一个2mlEP管，然后加入等体积的氯仿／异戊醇(24:1)I上下颠倒混匀50次，6000rpm，离心10min。

8. 吸取上清液与另一个1.5mlEP管中，加入100ul3MNaAc（ph=5）轻轻混匀后，再加入等体积预冷(-20℃)的异丙醇，上下颠倒混匀150次，混匀时的动作要轻柔，混匀结束后可见白色的絮状物（即为DNA)，10000rpm，离心5min。

9. 弃去上清液，加入350-500ul无水乙醇，轻轻振洗，然后10000rpm，离心5min，(如在去除酒精的时候，DNA沉淀有悬浮，可以加大离心的转速），将酒精倒掉，把EP管放在通风橱中风干。（一般约两小时即可，如没有完全风干，可以适当的延长时间）。

10. 待DNA风干后，加入TE100ul，在4°C冰箱中存放约十天后，使用紫外分光计检测DNA的浓度和纯度，依据所测浓度稀释分装，分装完成后将三种液体置于-20"C的冰箱中保存备用。

2 所需仪器

• 高速离心机（点我推荐）

• 涡旋振荡器（点我推荐）

• 水浴锅（点我推荐）

• 烘箱

• 冰箱

• 微量移液器10ul.100ul.1000ul.

• 高压灭菌锅

• 离心管：15ml、2ml、1.5ml、1.0ml、0.5ml

• 一次性塑料滴管

• 15ml玻璃研磨器

3 所需试剂

• 溶血试剂，细胞裂解液，蛋白酶-K。

• 平衡酚，氯仿／异戊醇，醋酸钠，异丙醇，无水乙醇，TE缓冲液。

• 10%SDS、1M NaCI、0.5M EDTA、lMTrisbase-Hcl

•  十二烷基硫酸钠(SDS)