利用系统级别的光谱成像技术分析细胞器的互作组学

细胞亚器互作组学研究(一)

系统级别的光谱学观察细胞亚器互作组

在猴的成纤维细胞系中，利用共聚焦显微镜，观察猴的活细胞中的细胞亚器的数量以及体积，速度位置以及动态互作的状态。作者描述了六种不同的膜结合细胞器（内质网、Golgi、溶酶体、过氧化物酶体、线粒体和脂滴）之间的两种、三种、四种和五种方式的相互作用的频率和位置，并显示这些关系随时间的变化。作者证明了每一个细胞器在三维空间中都有一个特征性的分布和分散模式，并且这六个细胞器之间有一个可重复的接触模式，这受微管和细胞营养状况的影响。作者研究的这种方法，在病理情况下，以及在药物处理的情况下，对细胞的细胞器的动态组的观察和都非常有效。

首先，作者在COS细胞中用荧光探针标记了Lyso，Mito,ER,过氧化物酶体，高尔基体，的marker基因的蛋白，并将脂滴于相应的染料进行孵育，以显示其踪迹。与此同时，作者通过带有光谱检测器的镭射扫描共聚焦显微镜进行城乡观察细胞器的互作，通过线性混合算法，作者可以观察到由不同的细胞亚器产生 的 荧光。作者对几种细胞亚器进行标记的蛋白Micrographs of a COS-7 cell expressing fluorescent fusion proteins LAMP1–CFP(Lyso) , Mito–EGFP(Mito) , ss-YFP–KDEL(ER), mOrange2–SKL(Perox), and mApple–SiT(Golgi), and labelled with BODIPY 665/676(Droplipid).

首先作者观察了脂滴与其他细胞器的互作。并且观察到脂滴与ER密切接触(ER作为脂质合成的场所)，且接触的时间相比于其他的细胞器更长，出来了与ER互作，脂滴也可以与其他的细胞亚器互作，这