流式细胞术(Flow Cytometry ,FCM)实验操作中存在各种可变因素,包括仪器设备、样本处理、试剂、操作过程、数据分析等。
今天我们针对在操作过程中遇到重点可变因素进行介绍,看如下:
一、针对样本的处理
观测样本外观
有严重溶血、凝聚或坏死的样本应弃用。
单细胞悬液的获取
外周血和骨髓穿刺液为天然单细胞悬液;活检组织常用机械分离和酶消化两种方法。不同的实验要求适用不同的方法。
对于需要进行膜抗原标记的,不仅是要获得足够的单细胞悬液,还要尽量保证细胞结构的完整性和抗原性,机械法较适用。
只需进行细胞周期或DNA倍体分析的,在机械法的基础上加酶消化(如胰蛋白酶、胃蛋白酶等)较适用。