BX795 是一种有效的选择性 PDK1 抑制剂 |MedChemExpress (MCE)

CAS：702675-74-9

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：BX795 是一种有效的选择性 PDK1 抑制剂，IC50 为 6 nM。 BX795 也是一种有效且相对特异的 TBK1 和 IKK 抑制剂，IC50 为 6 和分别为 41 纳米。 BX795 阻断 S6K1、Akt、PKCδ 和 GSK3β 的磷酸化，对 PKA、PKC、c-Kit、GSK3β 等的选择性较低。BX795 调节自噬[1] [2][3][4]。 IC50 和目标：IC50：6 nM (PDK1)[1]、6 nM (TBK1)、41 nM (IKK?)[2]  

体外：BX795 有效阻断 PC-3 细胞中的 PDK1 活性，正如它们阻断 S6K1、Akt、PKCδ 和 GSK3β 磷酸化的能力所示。 BX795 有效抑制塑料上的肿瘤细胞生长，对 MDA-468、HCT-116 和 MiaPaca 细胞的 IC50 分别为 1.6、1.4 和 1.9 μM。在软琼脂中，BX795 表现出更高的生长抑制作用，对 MDA-468 和 PC-3 细胞的 IC50 和 0.25 μM 分别[1]。此外，BX795 作为 TBK1/IKKε 的抑制剂，可阻断 TBK1 和 IKKε 介导的 IRF3 激活和 IFN-β[2] 的产生。在血小板生理反应中，BX795 对 2-MeSADP 诱导或胶原诱导的聚集、ATP 分泌和血栓素生成产生抑制作用[3]。

激酶试验：PDK1 采用直接激酶测定和耦合测定形式进行测定，测量 PDK1 和 PtdIns-3,4-P2 介导的 AKT2 激活。对于偶联测定，最终测定混合物 (60 μL) 含有：15 mM MOPS，pH 7.2，1 mg/mL 牛血清白蛋白，18 mM β-磷酸甘油，0.7 mM 二硫苏糖醇，3 mM EGTA，10 mM MgOAc，7.5 μM ATP、0.2 μCi [γ-33P]ATP、7.5 μM 生物素化肽底物 (生物素-ARRRDGGGAQPFRPRAATF)、0.5 μL 含 PtdIns-3,4-P2 的磷脂囊泡、60 pg 纯化重组人 PDK1 和 172 ng纯化的重组人 AKT2。室温孵育 2 小时后，在链霉亲和素包被的 SPA 珠上从 10 μL 测定混合物中捕获生物素标记的肽，并通过 Wallac MicroBeta 计数器中的闪烁接近度测量产物形成。形成的产物与孵育时间以及添加的 PDK1 和无活性 AKT2 的量成正比。 PDK1 以次优水平添加，以便该测定可以灵敏地检测 AKT2 激活的抑制剂以及 PDK1 或 AKT2 的直接抑制剂。为了直接测量 PDK1 活性，最终测定混合物 (60 μL) 含有 50 mM Tris-HCl，pH 7.5、0.1 mM EGTA、0.1 mM EDTA、0.1% β-巯基乙醇、1 mg/mL 牛血清白蛋白、10 mM MgOAc、 10 μM ATP、0.2 μCi 的 [γ-33P]ATP、7.5 μM 底物肽 (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) 和 60 ng 纯化的重组人 PDK1。室温下 4 小时后，我们添加 25 mM EDTA，并将一部分反应混合物点在 Whatman P81 磷酸纤维素纸上。将滤纸用0.75%磷酸洗涤3次，用丙酮洗涤1次。干燥后，使用富士磷光成像仪对过滤器结合的标记肽进行定量。

细胞试验：以低密度（1,500-3,000 个细胞/孔，0.1 mL/孔，96 孔板）接种的细胞孵育过夜。通过添加 10 μL/孔的化合物的 1% 二甲基亚砜和生长培养基（二甲基亚砜的最终浓度，0.1%），然后短暂摇动来进行化合物处理。将处理过的细胞孵育 72 小时，并通过添加 10 μL 代谢染料 WST-1 来测量活力。在读板器中在 450 nm 处读取 WST-1 信号，并减去无细胞或零时间细胞背景以计算净信号。结果报告为两次或多次重复的平均值±SE。

 参考详情：www.medchemexpress.cn/BX795.html

参考文献：

[1]. Feldman RI, et al. Novel small molecule inhibitors of 3-phosphoinositide-dependent kinase-1. J Biol Chem. 2005 May 20;280(20):19867-74.

[2]. Clark K, et al. Use of the pharmacological inhibitor BX795 to study the regulation and physiological roles of TBK1 and IkappaB kinase epsilon: a distinct upstream kinase mediates Ser-172 phosphorylation and activation. J Biol Chem. 2009 May 22;284(21):141

[3]. Dangelmaier C, et al. PDK1 selectively phosphorylates Thr(308) on Akt and contributes to human platelet functional responses. Thromb Haemost. 2014 Mar 3;111(3):508-17.