RT PCR常见问题

Q1.Amplification Plot 扩增曲线异常

A1:基线设置调整

实时荧光定量 PCR 反应的基线是指在 PCR 的最初几个循环中 (一般为第3至15个循环) 的信号水平，此阶段的荧光信号变化极小。 低水平的基线信号相当于反应的背景或“噪音” 。 每个实时荧光定量 PCR 反应的基线应通过用户分析或扩增曲线自动分析，根据经验确定。

此次实验用的是环介导等温扩增技术（Loop-mediated Isothermal Amplification，LAMP）,扩增效率高，阳性正常起峰比较早，选择基线第3至15个循环叫迟了已经。解决修改基线设置循环：

1：选择 结果分析 模块

2.点击分析旁边的设置小按钮

3.右键选择曲线异常样品目标

4.从上到下依次勾选三个目标设置

5.设置基线开始循环和结束循环的数值

应用后曲线正常