html中 %3cbr %3e的作用,羰基还原酶3(CBR3)重组蛋白

中文名称：羰基还原酶3(CBR3)重组蛋白

英文名称:Recombinant Carbonyl Reductase 3 (CBR3)

英文简称：CBR3

规格：10μg 50μg 200μg 1mg 1g

来源：原核表达

宿主：E.coli

羰基还原酶3(CBR3)重组蛋白分离纯化原则总结：

1 应尽可能利用蛋白质不同物理特性选择所用的分离纯化技术，而不是利用相同技术多次纯化；

2 不同的蛋白在性质上有很大区别，每一步纯化步骤都应当充分利用目的蛋白和杂质成分物理性质差异；

3 在纯化早期阶段要尽量减少处理体积，方便后续纯化；

4 在纯化后期阶段，再使用造价高的纯化方法，有利于纯化材料的重复使用，减少再生复杂性。

羰基还原酶3(CBR3)重组蛋白活性的问题:

1. 他的活性效果导致什么现象？ 观察你买的或是表达纯化的蛋白能否引起这个现象。这方面，你必须找出一个直接相关的表型作为判断标准。比如insulin处理后，Akt磷酸化加强，GLut4在质膜上分布加强，血糖降低，细胞内Glucose-6-p增多等等。你需要一个类似的生物学过程来指示他该有活性状况。

2. 建议加一个对照：直接转染质粒，表达到细胞内，看看对应效果怎么样，做一个阳性对照。转染表达的相当于细胞内自己产生的蛋白，一般活性没有问题。如果涉及到比如“*分泌，其他器官发挥功能”的例子，你可以把A细胞转染表达后的medium处理你的B细胞，先看看相应细胞上的效果有没有。务必要有一个比较肯定的阳性对照出来。不然后续实验说不清的，结果也就很可疑的。

羰基还原酶3(CBR3)重组蛋白方法

1.载体构建和细菌培养

1) 采用RT-PCR 扩增得到目的基因，构建到表达载体(PGEX-4T-1)上；

2) 用构建质粒转化表达菌BL21，LB 平板37℃；

3) LB 平板上挑取单一菌落接入5mL LB 培养基(100ug/mL Amp)中，37℃培养3~5h；

4) 将5mL 菌液接入1L LB(100ug/mL Amp)液体培养基中，37℃培养至OD60≈0.6，加入0.3mmol/L 的IPTG，

5) 16℃诱导16h；

6) 将培养好的菌液于5000r/min 离心10min，弃去上清液，收集菌体，离心后菌体沉淀悬浮于25mL Binding buffer 中。

2.细胞破碎和蛋白分离

1) 往悬浮好的菌液中加入适量蛋白抑制剂(10uL 的10mg/mL antipain，10uL 的10mg/mL leupeptin 和1mL

2) 的1mol/L PMSF)，冰浴放置；

3) 超声破碎，每个循环26 次，超声6s，间隔5s，视破碎效果共2～4 个循环，破碎后的菌体4℃ 1800r/min

4) 离心30min，上清保持在4℃；

5) GST 柱先用PBS 缓冲液平衡，上样结合30~60min，每5~10min 搅拌一次，流干；

6) 用2~3 倍体积PBS 缓冲液平衡清洗非特异性蛋白，流干，加入15mL 洗脱缓冲液洗脱；

7) 由于残存少量蛋白酶，洗脱出来的目的蛋白溶液可于4℃保存几小时；

8) SDS-PAGE 检测初步纯化效果，进行下一步纯化步骤。

羰基还原酶3(CBR3)重组蛋白解决方法

1) 裂解过程中，采用温和的裂解条件；

2) 在细胞裂解前的缓冲液中加DTT；

3) 浓缩样品，结合能力依赖浓度；

4) 可以通过降低结合的温度来改善结果；

5) 确认至少用5 倍柱体积的PH 6.5~8.0 的缓冲液平衡过。

ZY035Mu012S100钙结合蛋白A7(S100A7)重组蛋白Recombinant S100 Calcium Binding Protein A7 (S100A7)Mus musculus (Mouse)

ZY035Mu013突触融合蛋白1A(STX1A)重组蛋白Recombinant Syntaxin 1A, Brain (STX1A)Mus musculus (Mouse)

ZY035Mu014催乳素诱导蛋白(PIP)重组蛋白Recombinant Prolactin Induced Protein (PIP)Mus musculus (Mouse)

ZY035Mu021突触融合蛋白1A(STX1A)重组蛋白Recombinant Syntaxin 1A, Brain (STX1A)Mus musculus (Mouse)

ZY035Mu022成纤维细胞生长因子6(FGF6)重组蛋白Recombinant Fibroblast Growth Factor 6 (FGF6)Mus musculus (Mouse)

ZY035Mu023S100钙结合蛋白A7(S100A7)重组蛋白Recombinant S100 Calcium Binding Protein A7 (S100A7)Mus musculus (Mouse)

ZY035Ra011成纤维细胞生长因子6(FGF6)重组蛋白Recombinant Fibroblast Growth Factor 6 (FGF6)Rattus norvegicus (Rat)

ZY035Ra012催乳素诱导蛋白(PIP)重组蛋白Recombinant Prolactin Induced Protein (PIP)Rattus norvegicus (Rat)

ZY035Ra021催乳素诱导蛋白(PIP)重组蛋白Recombinant Prolactin Induced Protein (PIP)Rattus norvegicus (Rat)

ZY036Bo011转铁蛋白(TRF)重组蛋白Recombinant Transferrin (TRF)Bos taurus; Bovine (Cattle)

ZY036Bo012成纤维细胞生长因子9(FGF9)重组蛋白Recombinant Fibroblast Growth Factor 9 (FGF9)Bos taurus; Bovine (Cattle)

ZY036Ca011转铁蛋白(TRF)重组蛋白Recombinant Transferrin (TRF)Canis familiaris; Canine (Dog)

ZY036Eq011转铁蛋白(TRF)重组蛋白Recombinant Transferrin (TRF)Equus caballus; Equine (Horse)

ZY036Ga011成纤维细胞生长因子9(FGF9)重组蛋白Recombinant Fibroblast Growth Factor 9 (FGF9)Chicken (Gallus)

ZY036Hu011成纤维细胞生长因子9(FGF9)重组蛋白Recombinant Fibroblast Growth Factor 9 (FGF9)Homo sapiens (Human)

ZY036Hu012生长激素受体(GHR)重组蛋白Recombinant Growth Hormone Receptor (GHR)Homo sapiens (Human)