【方法篇】不同处理方法对质谱分析互作蛋白的影响

AP-MS技术是研究蛋白质-蛋白质相互作用(PPIs)的重要手段,文章对比了5种不同的胰蛋白酶消化方法,包括on-beads和elution-digest方法。研究发现,elution-digest方法在识别低丰度PPIs方面优于on-beads方法。具体而言,ABC法在识别高丰度PPIs中表现出色,而SDS-FASP法则更擅长识别低丰度PPIs。不同方法对RelA和BRD4互作蛋白的鉴定数量和质量有显著差异,影响到AP-MS的性能和结果。
摘要由CSDN通过智能技术生成

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特殊名词:

AP-MS 亲和纯化-质谱联用

PPIs 蛋白质-蛋白质相互作用

on-beads 对亲和珠子上结合蛋白直接进行酶切处理

elution-digestion 洗脱后溶解内进行消化

mass spectrometry interaction statistics(MiST) 质谱相互作统计

on-bead digestion in ammonium bicarbonatebuffer ABC法

on-bead digestion in trifluoroethanolbuffer TFE法

two-step digestion in urea buffer Urea法

SDS elution with filter-aided samplepreparation (FASP) SDS-FASP

SDS elution with SDS-PAGE and in-gel digestion SDS-Gel

亲和纯化-质谱联用技术(后简称AP-MS)已然是发现自然状态下蛋白与蛋白相互作用的首选办法,AP-MS的成功依赖于胰蛋白酶消化效率和胰蛋白酶消化后肽段的回收。在

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