玉米基因 ZmRPH1 编码一种微管结合蛋白，该蛋白控制植物株高和穗位高度。

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/pbi.13292

在禾本科作物中，矮秆是一种理想的农艺性状，因为它可以增强作物的抗倒伏能力，并允许更高的种植密度。在水稻（Oryza sativa）和小麦（Triticum aestivum）的育种中，矮秆和半矮秆突变体已被广泛使用，相关的“绿色革命”基因（如水稻中的sd1和小麦中的Rht）通常涉及赤霉素（GA）的生物合成或信号传导。然而，许多赤霉素生物合成/信号传导缺陷的玉米（Zea mays）突变体表现出多效性表型，对产量不利，因此不适用于玉米育种。鉴于玉米株高主要由节间细胞分裂和细胞扩展驱动的茎伸长决定，鉴定直接调控细胞伸长的新调控因子可能是一种解决方案。

微管在引导植物细胞极性生长中起着关键作用，这种作用依赖于其组织结构和动态变化，并且受到多种微管结合蛋白（MAPs）的调控。然而，玉米中的MAPs大多尚未被研究。最近，拟南芥QWRF家族的几个蛋白被鉴定为MAPs。通过搜索Gramene数据库，我们发现了一个基因（ID为Zm00001d028073），该基因编码一个与QWRF同源的蛋白。我们将该基因的CDS克隆到由玉米UBI启动子驱动的过表达载体pBCXUN中，并通过农杆菌介导的转化方法将其导入玉米自交系B73-329中。过表达转基因株系（OE2和OE4）的胚芽鞘显著变短且变宽（图1a-c），其薄壁细胞长度减少而宽度增加（图1d-f）。我们将这个基因命名为ZmRPH1（Reducing Plant Height 1）。此外，ZmRPH1过表达还导致玉米幼苗根变短，细胞长度减少（图1g-h）。这些数据表明，ZmRPH1在调控玉米细胞极性生长中具有普遍作用。

为了测试ZmRPH1是否像其拟南芥同源物一样是一种新的微管结合蛋白（MAP），我们进行了体外微管共沉降实验。我们采用TNT快速偶联转录/翻译系统（Promega，美国威斯康星州麦迪逊）来表达ZmRPH1蛋白。经过高速离心后，生物素标记的赖氨酸标记的ZmRPH1蛋白与预先聚合的微管一同沉降于沉淀中，表明其在体外直接与微管结合（图1i）。接着，我们将ZmRPH1与绿色荧光蛋白（GFP）融合，并瞬时表达到玉米原生质体中。我们观察到与mCherry-微管蛋白标记的微管共定位的丝状结构（图1j）。因此，我们得出结论，ZmRPH1是玉米中的一种微管结合蛋白（MAP）。

接下来，我们研究了ZmRPH1在微管中的功能。众所周知，在快速伸长的细胞中，皮层微管会组织成横向平行阵列，以引导细胞壁中微纤维的沉积。当细胞生长减缓或停止时，皮层微管会重新组织成随机或纵向排列的阵列（Hamada，2014）。我们观察了伸长区的根表皮细胞，其中的微管可以通过抗α-微管蛋白抗体的免疫荧光显微镜轻松可视化。在2日龄的幼苗中，我们观察到93%的B73-329根表皮细胞中的微管呈横向排列，而OE2或OE4细胞中横向微管的比例不到10%。相比之下，大多数OE2或OE4细胞中的微管呈斜向或随机排列（图1k，l）。我们进一步在拟南芥中过表达ZmRPH1，得到的过表达株系（OX1和OX2）与对照相比具有更短的黄化下胚轴。通过将OX1和OX2与表达GFP-MBD的转基因株系杂交，我们在活细胞中观察到GFP-MBD标记的微管。我们发现，与对照组（>60%）相比，ZmRPH1过表达显著降低了OX1和OX2下胚轴中具有横向微管的细胞频率（约为30%；图1m，n）。总体而言，上述结果表明，ZmRPH1通过调节皮层微管的方向来调节细胞伸长。