细胞克隆形成实验是测定单个细胞增能力的有效方法,常用于抗肿瘤药物敏感性测定、基因治疗、肿瘤放射生物学等方面的研究。细胞克隆形成实验的常用方法有平板克隆形成和软琼脂克隆形成两种。
平板克隆形成实验与软琼脂克隆形成实验的区别在于前者操作简便,可直接将细胞接种于培养器皿培养,细胞间泌的促生长因子可在培养液中扩散,有助于克隆形成率的提高,适用于贴壁生长细胞。而软琼脂克隆形成实验培养基需添加软琼脂,以模拟体内生长环境,适用于悬浮细胞。
细胞克隆形成实验的注意事项:
1. 实验成功的关键之一是细胞悬液的制备与接种密度,细胞一定要分散均匀,不能有细胞团,接种密度不能过大。
2. 接种完毕后,需将培养基置于37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周,期间需每隔3 d换一次液,换液过程需缓慢加入培养基,避免将细胞吹起。
3. 当肉眼可观察到培养皿中出现克隆后终止培养