STING 突变株：STING SAVI 报告基因细胞株

InvivoGen（国内授权代理欣博盛生物）提供给一系列基于人源THP1单核细胞系的STING突变体的报告基因细胞株。其中，有两款表达STING- associated vasculopathy with onset in infancy（SAVI）的功能获得性突变体(S154 and M155)。SAVI患者在STING蛋白中显示出单一突变，导致其持续激活和ISG的过度活化。S154是新生突变1，M155是遗传突变2。STING SAVI报告基因细胞株是筛选STING通路抑制剂便捷有力的工具。
• THP1-Dual™ KI-hSTING-S154     • THP1-Dual™ KI-hSTING-M155

描述
THP1-Dual™ KI-hSTING-S154细胞和THP1-Dual™ KI-hSTING-M155细胞均来自THP1-Dual™ KO-STING细胞，该细胞衍生自THP-1细胞，稳定敲除了内源性人源STING的双等位基因并稳定整合了两种可诱导分泌的报道基因（Lucia萤光素酶和SEAP（分泌型胚胎碱性磷酸酶）。THP1-Dual™ KO-STING细胞敲入了“野生型”R232人源STING突变体3的无内含子编码序列和一个S154 或M155突变位点。IRF3和NF-κB通路能够通过分别测试Lucia荧光素酶或SEAP活性进行检测。细胞培养上清中的报告基因蛋白活性能够使用QUANTI-Luc™ and QUANTI-Blue™检测试剂进行检测。SAVI报告基因细胞对Blasticidin和Zeocin™有抗性。

结果
功能获得(Gain-of-function)的活化-THP1-Dual™ KI-hSTING-S154细胞和THP1-Dual™ KI-hSTING-M155细胞均均可以持续活化ISG，而THP-1-Dual™ KI-hSTING-R232却不能。加入IFN-β或STING激动剂将进一步促进ISG的活化。注意，结果已被非刺激细胞背景信号标准化。因为其持续活化STING的特性，SAVI细胞的背景非常高，诱导ISG应答的增加倍数低于R232对照细胞。
抑制剂功能-加入TBK-1抑制剂BX795，或Brefeldin A，一种抑制蛋白从ER转运到高尔基体的蛋白转运抑制剂，能够显著抑制SAVI细胞中STING信号的转导。所以，这些细胞能够用于筛选STING的抑制剂。

 

1. Munoz J. et al., 2015. Stimulator of interferon genes-associated vasculopathy with onset in infancy: a mimic of childhood granulomatosis with polyangiitis. JAMA Dermatology 151: 872-7.

2. Jeremiah N. et al., 2014. Inherited STING-activating mutation underlies a familial inflammatory syndrome with lupus-like manifestations. The Journal of Clinical Investigation 124: 5516-20.

3. Yi G. et al., 2013. Single nucleotide polymorphisms of human STING can affect innate immune response to cyclic dinucleotides. PLOS ONE 8: e77846。

 

PRODUCT	QUANTITY	CAT. CODE
THP1-Dual™ KI-hSTING-S154 (SAVI) cells	3-7 x 106 cells	thpd-s154
THP1-Dual™ KI-hSTING-M155 (SAVI) cells	3-7 x 106 cells	thpd-m155

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PRODUCT	DESCRIPTION	CAT. CODE
THP1-Dual™ KI-hSTING-R232 cells	R232 variant- (“wild-type”) expressing cells	thpd-r232
2’3’-cGAMP	Cyclic dinucleotide	tlrl-nacga23
2’3’-c-di-AM(PS)2 (Rp,Rp)	Cyclic dinucleotide	tlrl-nacda2r-01

对IFN-β或STING激动剂的ISG应答：使用104 U/ml IFN-β, 10 μg/ml 2’3’ cGAMP或2’3’ cGAMP(PS)2(Rp/Sp), 30 μM BX795 or 10 μg/ml Brefeldin A刺激衍生自THP1-Dual™细胞。孵育过夜后，通过使用QUANTI-Luc™检测上清中Lucia荧光素酶活性测试ISG应答。Bar值表示非刺激细胞中背景信号标准化的活性百分比。