肠激酶(Enterokinase,EK或Enteropeptidase,EP,EC 3.4.21.9)是哺乳动物十二指肠内的一种异源二聚体丝氨酸蛋白酶,分子质量为150ku,由1条115ku的重链和1条35ku轻链组成,两条链通过一对二硫键相连。重链参与EK在消化道细胞膜上的锚定以及与胰蛋白酶的结合,轻链具有催化活性,可以特异性识别Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列,将胰蛋白酶原活化为胰蛋白酶, 从而启动各种酶原活化的级联。通常EK的切割位点位于赖氨酸之后,不切割识别序列后是脯氨酸的识别位点。由于经EK裂解融蛋白所释放的目的多肽具有和野生型完全一致的N-末端氨基酸序列, 因而可作为蛋白表达体系中融合蛋白的切割试剂。
MyBioSource艾美捷全种属的牛肠激酶ELISA检测试剂盒--基于双抗夹心ELISA的原理,实现对样本中肠激酶的定量检测。
MyBioSource 艾美捷牛肠激酶ELISA检测试剂盒实验原理:
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被牛肠激酶(EK)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛肠激酶(EK)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
MyBioSource 艾美捷该试剂盒样本处理及要求:
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
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