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RSS订阅原创 《分子生物学》Prokaryotic Gene Expression原核生物基因表达
基因平时是开启的，处在产生蛋白质或酶的工作过程中，由于一些特代谢物或化合物的积累而将其关闭，阻遏了基因的表达。：指一些基因在特殊的代谢物或化合物的作用下，由原来关闭的状态转变为工作状态，即在某些物质的诱导下使基因活化。操纵子（operon）是原核生物中的一个功能单位，由一组结构基因及其共同受控的调控区域构成。影响通常较持久，也往往是结构性或位置性的调控。阻遏蛋白与操纵子结合后，会阻止 RNA 聚合酶启动转录，从而关闭整个操纵子。（也称 CAP-cAMP 系统），它可以增强 lac 操纵子的转录效率。
2025-12-10 20:04:54
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原创 《基因工程》第九章 酵母菌基因工程
由于 YAC 片段太大，不易完全控制连接方向，因此可能出现两个或多个不相邻的基因组碎片被错误地“拼接”进同一个 YAC 插入片段。由于大小相近（都是大型线性 DNA），传统的质粒提取方法无法分离 YAC 和酵母染色体。如果说大肠杆菌是外源基因最成熟的原核生物表达系统，则酵母菌是最成熟的真核生物表达系统。YEP 实验中最常用，拷贝数高，表达效率高，但工业上不常用YIP，因为追求稳定。，且是稳定的突变体（缺失突变或多点突变），利用遗传互补进行转化体的筛选。酿酒酵母表达系统、甲醇酵母表达系统、实例。
2025-12-09 13:59:16
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原创 《基因工程》第三章 基因操作的主要技术原理
在超速离心场下，它们会停留在溶液的较上层位置，而不是沉到 CsCl 高密度的底部。而且蛋白质和 EtBr 不怎么结合，分子量较小，也因此不会进入较深的密度区。因此 RNA 在 CsCl 梯度中沉得更深，聚集在接近管底的位置。此外，RNA 含有 2’-OH 基团，增加分子整体的密度。蛋白质的平均密度 (~1.3 g/cm³)RNA（尤其是 rRNA 和 tRNA）分子。，与 EtBr 结合相对少。结合 EtBr 少 →。
2025-09-30 14:32:49
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原创 《生物统计学》绪论➕试验设计的原理与方法
随机误差（random error）也称抽样误差（sampling error）、偶然误差（accidental error），是由于试验中许多无法控制的偶然因素所造成的试验结果与真实值之间的差异，是不可避免的。•因素（FACTOR）,试验中所研究的影响试验指标的原因或原因组合称为试验因素，或处理因素，简称因素或因子。•水平（level）,每个试验因素的不同状态（处理的某种特定状态或数量上的差别）称为因素水平，简称为水平。（因子，factor）：对试验研究的对象施加的同一类性质相似的试验措施的总称。
2025-09-28 22:05:41
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原创 《分子生物学》DNA生物合成
如果阻断 DNA 连接酶（DNA ligase）的活性，即使经过较长的标记时间，这些小片段仍然存在。在这一阶段，复制起始点被识别，并在复制叉（replication fork）形成。👉 典型于线粒体 DNA 和叶绿体 DNA，复制时会形成三链结构（D-loop）。，由单条多肽链组成。DNA复制需要单链结合蛋白（SSBP）来稳定分开的单链，并防止DNA链降解。三个结构域组成，DNA链位于“掌”上的沟槽中，由“指”和“拇指”固定。缺刻平移的过程是用新合成的DNA片段替代双链DNA中已有的部分片段。
2025-09-28 16:35:58
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原创 《基因工程》分子克隆载体 Vectors
λ头部只能容纳自身DNA的78-105%，即37-51 kb，仅可插入2.5kb外源DNA片段——基因编码氯霉素乙酰转移酶，使氯霉素乙酰化，导致乙酰化的氯霉素不能结合在核糖体上。端突起的可互补的粘性末端 （cohensive end, cos。由于λ能裂解宿主细胞，因此提取DNA或基因表达产物都比较容易。同一种限制酶有多个识别位点，不利于外源DNA插入——体外构建的重组λ DNA分子难于直接导入宿主细胞——的质粒很难导入感受态的大肠杆菌细胞。分子量大，一般属严紧型。分子量小，一般属松弛型。
2025-09-22 20:34:28
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原创 《分子生物学》基因➕基因组➕基因组学
通过人为改变或敲除某个基因的序列，观察其对生物表型的影响，从而推断该基因的功能。微卫星 DNA（Microsatellite DNA）：<150bp，2/3/4bp 的短串联重复，常用于 DNA 鉴定。随着DNA双螺旋结构的发现，人们认识到基因本质上是DNA（或在某些病毒中为RNA），并能编码蛋白质或功能性RNA。（还可补充：snRNA（小核RNA）、snoRNA（小核仁RNA）、lncRNA（长链非编码RNA）等）。：两个基因的DNA序列部分重叠，通过不同的起始密码子或终止密码子翻译出不同的蛋白质。
2025-09-21 17:14:45
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原创 《分子生物学》2.1遗传物质的分子本质➕2.2核酸的结构➕2.3核酸的变性与复性
用 T2 噬菌体实验证明 DNA 是遗传物质：他们用放射性同位素分别标记噬菌体的 DNA（³²P）和蛋白质外壳（³⁵S），让其感染大肠杆菌后通过搅拌和离心分离，结果发现只有 DNA 进入细菌并指导新噬菌体的合成，而蛋白质外壳留在外部，说明遗传信息来自 DNA 而非蛋白质。基于碱基特异性化学修饰 DNA，并在修饰碱基相邻位置切断 DNA 骨架。DNA 测序是确定 DNA 分子中核苷酸精确排列顺序的过程，包括所有用于测定 DNA 链中四种碱基（腺嘌呤 A、鸟嘌呤 G、胞嘧啶 C、胸腺嘧啶 T）顺序的方法。
2025-09-15 21:01:40
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原创 其他常用工具酶和思考
解决思路：用不同酶:DNA 比例做对照（概念上“增加酶相对量”或“减少 DNA”），观察是否改善；解决思路：可以用能产生单切位点的另一酶（或其他方法）先把质粒线性化，再验证目标位点，或者使用不同策略验证位点是否存在（序列测定/ PCR）。如果对照也不切，酶可能有问题，换新酶再试。可能原因：酶贮存液中甘油含量高，若在反应体系中过量加入，可能抑制酶活或产生“star activity”。可能原因：反应条件（错误缓冲、低离子强度、过量酶或过长反应）导致酶发生非特异切割，反而影响检测特定位点。
2025-09-15 20:11:44
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原创 限制性内切酶
一旦入侵或压力下（比如噬菌体感染），抗毒素先降解，毒素活跃 → 让宿主进入“休眠/死亡”，阻止病毒复制。：由多个基因组成的防御岛（defense island），能识别并阻断噬菌体 DNA 的扩增。：不像 RM 那样切割外来 DNA，而是通过甲基化模式识别外源 DNA，然后阻止它的复制。：细菌把“入侵者 DNA 的片段”存进自己的基因组，像一个“黑名单数据库”。：利用小分子信号（环状寡核苷酸）激活抗噬菌体效应器，像细菌版的“先天免疫”。：感染后，宿主细胞触发“程序性死亡”，阻止噬菌体在群体中传播。
2025-09-15 18:22:57
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原创 Rootsnap
如果描根中途断开，不可以直接从上一线段的最后开始，需要另起一条线段，之后拖拽第二条线段的起点与第一线段的终点重合。描完图片上所有根之后即可导出数据，格式为Excel表格。如需要保存图片，需要提前截屏保存。点开左下角箭头，展开之后可以看到导入图片的缩略图，右键看到可以选择DPI的选项。作为植物描根软件，只能用于Windows系统，目前Mac系统尚不能兼容。单击每个小点用鼠标滚轮即可调整这个点的直径符合实际根的直径。自动识别目前无法使用，只能使用手动描根。选择所对应的像素，点击apply。
2025-09-14 23:31:39
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空空如也
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