从动物血液中提取和纯化胆碱酯酶

由于农药残留的种类较多,采用金标免疫或其他方案都难以一次性判断到底有没有有机磷、氨基甲酸酯类（其实还有有机氯只是国家禁用了该类型农药）农药，所以古老的酶抑制法直接仍在使用。然而使用酶抑制法，胆碱酯酶就是必不可少的试剂了，下面记录一种从动物血液里边提取胆碱酯酶的方法。还有养苍蝇从苍蝇头部提取的下次再记。 下面的方案来源于广东省微生物研究所  的研究。

（１）将新鲜动物血液于室温下凝固后，于０～４℃下冷冻２～４８小时，取其上清液；

（２）将上一步所得的上清液以２０００～１５０００ｒ．ｐ．ｍ，０～４℃离心，取其上清液，即得乙酰胆碱酯酶粗提液；

（３）用硫酸铵沉淀法纯化乙酰胆碱酯酶： ａ、在冰浴中于乙酰胆碱酯酶粗提液中缓慢搅拌下加入硫酸铵，使酶液中硫酸铵的饱和度在２０％～９０％的范围内； ｂ、上述所得溶液于３０００－１５０００ｒ．ｐ．ｍ，０－４℃冷冻离心，保留沉淀； ｃ、加入ｐＨ７．５－８．０的磷酸缓冲液溶解沉淀，并用ｐＨ７．５－８磷酸缓冲液稀释２－１０倍；

（４）用透析法脱硫酸铵：将上步经过硫酸铵沉淀的酶液装入透析袋中，用其体积２０～３０倍的蒸馏水透析，直至透析液不产生沉淀为止；

（５）将上一步所得的酶液浓缩，干燥，即得已纯化的乙酰胆碱酯酶制品。