2021-05-28

5分钟教会您如何建立动物实验性疼痛模型（1）

实验性疼痛模型的建立是研究伤害性知觉及疼痛的基础，不同的刺激可以产生不同类型的疼痛，从疼痛持续时间上可把疼痛分为急性疼痛，持续性疼痛及神经病性疼痛。

急性疼痛可以用热板( hot-plate)或尾闪(tail-flick)试验；持续性疼痛主要是周围组织的损伤或炎症引起，如福尔马林(fonna-lin)试验；神经病性疼痛是由于外伤，疾病及毒素引起的慢性持续性的异常疼痛，一般的镇痛药对这类疼痛根本不起作用，可以用慢性压榨损伤( ca)，部分坐骨神经结扎(PSL)及脊髓神经结扎(SNL)试验。

这些疼痛模型的建立，对于临床前期镇痛药或疼痛机制的研究起着重要作用，近年来转基因动物的研究，又从另一个方面开拓了疼痛研究的方向，不少的基因敲除(kock-out)小鼠进一步证实了早先用疼痛棋型建立的疼痛机制学说。下面就疼痛模型分别作一介绍。

一、热板试验

伤害感受器受到一定强度的刺激后，感觉信号传导到神经中枢，再反馈到运动中枢即可引起身体的反应或保护性反射（肢体回缩）。疼痛实验中，动物对刺激的反应时间是一项可靠的参数，例如，测试某种镇痛药的疗效时，就常常比较对照组与给药组间，动物对热致痛刺激引起的反应时间，如果给药组动物对刺激的反应时间明显也延长，说明该药物具有抗伤害知觉效应或称镇痛反应。 感热传感器受到过高温度热可引起疼痛的感觉，因而热刺激常用于急性疼痛模型。

例如，将动物放置在可以加热的平板上，动物感受到一定热度后，即会舔它的脚爪子或跳起来，这就是热板( hot-plate)试验。记录从刺激开始到动物反应的时间，可以知道刺激强度与反应大小关系，一般来说，刺激强度越大，反应就越明显。热刺激强度的大小，即温度的高低。

为了使实验便于对照与重复，急性热刺激疼痛试验的热板试验，都用统一的标准：自动热板温度为52 - 55度，热持续时间为180s，测试的反应用第十个反跳的时间，一般这些刺激与反应时间都可用记录仪自动记录。吗啡的镇痛试验中，腹腔注射8mg/kg，可产生近最大的抗伤害知觉反应的应答时间为30min。

（一）实验材料

1．实验动物健康成年雄性小鼠(30 - 35g)或大鼠(200 - 250S;)，分组饲养。

2．实验药物生理盐水（对照）与镇痛药物(如吗啡，lOmg/kg)。

3．带27针头的Iml注射器。

4．热板试验仪或能控制温度的金属板。

5．秒表或计时器。

（二）实验步骤

1．从动物房取出实验动物，称重后，让动物在实验室适应15 - 30min，将对照组与实验组分开。

2．药物准备对照组（生埋盐水等）及给药组（如吗啡等，计算药物浓度）。

3．仪器准备将热板温度调定为55度（用于小鼠）或52.5度（用于大鼠）。

4．药物注射将不同的药物包括对照溶液，随机顺序注射到实验动物体内。注意计算好给药时间与试验测试的时间间隔，试验持续时间，同时给出足够的机动时间（如实验记录，动物标记，药物更换等）。

5．药物作用开始或高峰期(如给药后30min)，即开始实验：将动物放到热板上并立即开始计时（按动计时器），观察动物开始出现反应（如舔它的脚爪）的时间或直到终止(cut-otT)时间（如因为药物关系，动物没有明显的反应时，应在一定时间内终止试验，以免动物烧伤，例如可设定为30。）。

6．将动物放到热板上到反应出现时的潜伏期或终止实验时间记录下来，在所有实验动物完成测试后，分组将其平均并作统计学评估。

热板试验时，常用到一种称为最大可能效应百分比( peret maximum possible effect,% MPE)，即 MPE(%)=[（给药后一给药前）／（终止时间一给药前）] x 100 这里给药前与给药后均指反应潜伏期，所有动物在测试前，应该先测定一下它的反应潜伏期（即给药前反应潜伏期）；给药后反应潜伏期是指动物接受药物（包括对照用生理盐水或其他载体）注射（或灌注）后实验中的反应潜伏期；终止时间是指给药后动物不能对热作出反应而终止试验的时间。

（三）注意事项

1、有时给药前（或对照组）动物的反应潜伏期太快，以致不能测定准确，说明温度太高（刺激强度太大），应适当减少其强度。

2、按文献中建议的剂量给药盾（如吗啡类），观察不到应有的反应，也可能表明刺激强度太大，应适量减低一点温度再测试。

3、如果刺激强度太弱（热板温度设定较低），给药前或对照组动物则可能测不到反应或反应潜伏期很靠近试验终止时间，而对于给药组动物没有反应是因为其对照组动物反应时间范围很窄，这些都必须加大刺激强度。

4、值得注意的是，必须保持所有的实验程序一致，尽量轻巧抓取动物，让动物有足够的时间适应实验者的气味及实验室环境，否则可造成实验结果的明显波动或不能重复。

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