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RSS订阅原创 免疫细胞培养攻略之后续研究
免疫细胞培养的后续研究主要通过流式细胞术、ELISA、细胞共培养等技术评估细胞功能。本文重点介绍了三个热门研究方向：1）NK细胞杀伤能力鉴定，通过共培养实验检测其对靶细胞的杀伤作用；2）混合淋巴细胞反应（MLR），评估T细胞对异体细胞的反应能力；3）Treg体外抑制实验，研究调节性T细胞对CD8+T细胞的抑制作用。这些实验为免疫细胞功能研究提供了重要方法，包括细胞增殖、细胞因子分泌等指标的检测，在肿瘤免疫治疗等领域具有广泛应用价值。
2026-03-23 10:24:22
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原创 免疫细胞培养攻略之质量优化
本文系统介绍了免疫细胞培养过程中质量优化的关键内容，重点阐述了支原体和内毒素两大污染源的防控措施。详细分析了支原体的形态特征、污染来源、对细胞的影响（抑制生长、破坏DNA等），并提供了10项预防建议和多种检测方法。同时介绍了内毒素的特性、污染途径及其对细胞的危害（改变功能、加速凋亡等），推荐了预防措施和检测技术（推荐重组C因子法）。文章强调质量优化应以预防为主，为免疫细胞培养提供重要参考。
2026-03-23 10:19:26
183
原创 免疫细胞培养攻略之扩增&培养
本文详细介绍了免疫细胞培养的扩增与培养环节，包括培养体系建立、传代流程、冻存和复苏三个关键步骤。针对不同免疫细胞（如T细胞、NK细胞、单核细胞和树突状细胞）的特异性培养方案进行了阐述，重点说明了细胞因子添加、激活信号和分化诱导等关键技术要点。同时提供了细胞传代和冻存复苏的标准操作流程及注意事项，为免疫细胞的体外扩增培养提供了系统指导。
2026-03-20 11:07:46
343
原创 免疫细胞培养攻略之分型鉴定
分型鉴定(Phenotyping)：利用细胞表面标记物进行细胞鉴定，目前常用的方法是流式细胞术。如果我们利用流式分选得到目的细胞，一般来说，分选后需要回测细胞进行目的细胞的纯度验证，即分型鉴定，也就是说流式分选后目的细胞的分型鉴定与分选所用的细胞标记物基本相同。如果我们利用磁珠分选得到目的细胞，就意味着我们需要再设计一个流式实验进行分型鉴定。
2026-03-20 11:02:27
339
原创 免疫细胞培养攻略之细胞分选
本文详细介绍了免疫细胞培养的第二关键步骤——细胞分选技术。文章系统阐述了四种主流分选方法（磁珠分选、流式分选、免疫密度梯度分选和微流控分选）的原理与优缺点，重点解析了磁珠分选的四种策略（阳性/阴性/多重/全血分选）和流式分选的操作要点。通过对比表详细比较了流式与磁珠分选的技术差异，并以Tregs细胞分选为例，展示了阴性分选结合阳性分选的具体应用方案。文章还提供了人免疫细胞标记物图谱、荧光素选择原则等实用信息，为科研人员选择合适的分选方法提供了系统指导。
2026-03-19 08:58:33
374
原创 免疫细胞培养攻略之样本制备
《免疫细胞培养攻略合集》首篇详解样本制备流程。免疫细胞包括淋巴细胞、巨噬细胞等，其培养对免疫疗法至关重要。文章首先介绍免疫细胞分布比例（表1-2），随后重点讲解样本预处理和制备方法：血液样本需用肝素抗凝，通过Ficoll密度梯度离心获取PBMC（图2）；实体组织采用机械+酶解法获得单细胞悬液（表4对比不同方法）。注意事项包括无菌操作、温度控制及离心参数调整等。下期将讲解细胞分选技术。
2026-03-19 08:47:49
292
原创 一文说透Native-PAGE
摘要：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是一种在非变性条件下分离活性蛋白质的技术，主要用于酶鉴定和同工酶分析。与SDS-PAGE不同，Native-PAGE不使用SDS等变性剂，保持蛋白质天然构象和功能。实验需根据蛋白质酸碱性选择缓冲系统，注意控制电泳温度防止变性。电泳后通过考马斯亮蓝或银染检测，并可切胶回收活性蛋白。该技术的关键在于维持蛋白质天然状态，操作条件需根据目标蛋白特性优化。
2026-03-16 09:37:38
400
原创 外泌体研究解决方案
外泌体是由细胞分泌的纳米级囊泡，广泛存在于体液中，具有细胞间通讯和物质交换功能。目前主要提取方法包括超速离心、密度梯度离心、尺寸排阻色谱等，表征手段涵盖电镜、动态光散射等技术。荧光标记是常用的示踪方法，如DiR标记可用于体内外泌体追踪。外泌体在肿瘤诊断、疾病治疗和药物递送等领域具有重要应用前景。随着分离和表征技术的进步，外泌体研究将为临床诊疗提供新思路。
2026-03-16 09:33:14
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原创 THP-1分化成巨噬细胞诱导攻略
THP-1细胞是研究巨噬细胞功能的重要模型，可通过PMA诱导分化为巨噬细胞。进一步使用LPS+IFN-γ或IL-4+IL-13可分别诱导M1和M2型巨噬细胞极化，两者在形态和标志物上存在显著差异：M1型伪足多且分叉明显，表达CD68、CD80等标志物；M2型呈长条状，表达CD206、CD163等标志物。该诱导方法为研究巨噬细胞在免疫调节和疾病中的作用提供了有效工具。
2026-03-12 09:40:22
347
原创 磷酸化蛋白WB没结果？看完这篇文章再说
摘要：磷酸化蛋白Western Blot(WB)是科研难点，主要由于磷酸化蛋白丰度低(仅占总蛋白10%)且修饰可逆易降解。实验关键点包括：1)预查PhosphoSitePlus数据库确认磷酸化位点；2)样品需快速处理并添加蛋白酶/磷酸酶抑制剂；3)需设置总蛋白和普通内参双重对照；4)上样量要充足；5)推荐使用BSA替代牛奶封闭；6)一抗4℃过夜孵育。注意避免煮沸破坏磷酸化位点，操作全程保持低温。（149字）
2026-03-12 09:07:19
338
原创 植物血凝素的生物学功能与应用指南
摘要：植物血凝素(PHA)是从红芸豆中提取的糖蛋白，包含L、E两种亚基，形成5种异构体。PHA-L（L4）主要用于T细胞刺激和免疫研究；PHA-E（E4）用于红细胞凝集和糖基化研究；PHA-P和PHA-M则用于细胞增殖和细胞因子产生研究。应用案例显示，PHA-L可激活Jurkat T细胞用于癌症机制研究，PHA-M则用于探究氟化物对免疫系统的影响。不同PHA形式因其特定生物学活性在免疫学和细胞生物学研究中具有独特价值。
2026-03-11 13:46:31
326
原创 WB疑难杂症——膜蛋白
膜蛋白研究概述 膜蛋白是细胞膜的重要组成部分，占人类蛋白质组的25%，可分为外在膜蛋白、内在膜蛋白和脂锚定膜蛋白三类。它们在物质运输、信号转导等关键生物学功能中发挥重要作用。膜蛋白研究具有重要价值：约60%的药物靶点为膜蛋白，其功能异常与多种疾病相关；研究有助于理解细胞通讯、环境适应等基础生物学问题；在农业、环境科学等领域也有应用前景。实验技术上，可通过Uniprot等工具预测蛋白定位，WB实验需注意膜蛋白易聚集、难提取等特点，建议采用适当变性温度、凝胶浓度和转膜方法。
2026-03-11 13:41:34
314
原创 解锁蛋白质的秘密：蛋白信息查询工具与使用指南
本文介绍了三种常用的蛋白质信息查询工具：UniProt、The Human Protein Atlas和The human immune system数据库。UniProt提供蛋白质基本信息、序列、定位、修饰及相互作用等数据；The Human Protein Atlas专注于人类蛋白质在组织和细胞中的表达分布，包含大量免疫组化图谱；The human immune system则聚焦免疫细胞间相互作用的蛋白质网络。文章详细说明了各数据库的使用方法，包括如何查询蛋白质功能、表达模式、亚细胞定位、翻译后修饰等
2026-03-10 10:24:45
404
原创 LncRNA数据深度挖掘工具——RIP技术
长链非编码RNA(lncRNA)研究主要包括三个步骤：高通量筛选鉴定非编码转录本，确定差异表达的候选lncRNA，以及通过基因操作和分子互作实验验证其功能。RIP技术是研究RNA-蛋白互作的关键方法，利用特异性抗体沉淀RNA-蛋白复合物，结合qPCR或测序分析。常见问题包括样本处理、引物设计、抗体选择等，可通过优化实验条件解决。该研究有助于揭示lncRNA的调控机制和疾病治疗靶点。
2026-03-10 10:16:57
359
原创 类器官原位活死染色实验攻略
摘要：Calcein-AM/PI双染法可用于检测类器官活性和凋亡状态。Calcein-AM通过酯酶作用标记活细胞（绿色荧光），PI仅标记死细胞（红色荧光）。实验需配制1×缓冲液和工作液（2μM Calcein-AM+4.5μM PI），37℃孵育1小时后用490nm激发光观察。注意事项包括试剂的稳定性、PI的致癌性及分装保存要求。该方法可同时观察活/死细胞，适用于类器官培养的状态评估。
2026-03-09 10:51:12
346
原创 WB内参选择指南
内参是Western Blot实验中用于标准化和校正误差的管家蛋白，如β-Actin、GAPDH和β-Tubulin。它们能校正上样误差、实现半定量分析，并作为实验质量控制指标。选择内参需考虑目的蛋白分子量（需相差5kDa以上）、样本种属、细胞定位（胞质/核蛋白）及实验条件（如缺氧可能影响GAPDH）。抗体孵育可采用顺序法（先目标后内参）、双膜法（分子量分区）或同步孵育（分子量差异大时）。合理选择内参对确保实验结果可靠性至关重要。
2026-03-09 10:44:47
351
原创 细胞活性氧（ROS）检测攻略
摘要：活性氧(ROS)是细胞代谢产物，在信号传导中起重要作用，但过量会导致细胞损伤。本文重点介绍了荧光染色法检测ROS的原理和操作步骤，以DCFH-DA探针为例详细说明了原位装载和收集后装载两种方法，包括细胞准备、药物诱导、探针装载、清洗及荧光显微镜和流式细胞仪检测流程。研究显示，DCFH-DA能有效检测细胞内ROS水平，为理解细胞生理功能和环境因素导致的损伤提供重要手段。
2026-03-06 16:05:18
422
原创 关于WB实验中的marker，你应该知道的事
蛋白Marker是用于蛋白质电泳分析的分子量标准，主要分为天然蛋白Marker和变性Marker两大类。天然Marker保持蛋白质自然特性，适用于非变性电泳；变性Marker经过SDS处理，迁移更可预测。按染色方式可分为预染和非预染Marker，预染型便于实时监测电泳过程，非预染型则更精确。选择Marker需考虑实验类型（变性/非变性）、目的蛋白分子量范围及检测需求（是否需要实时观察）。宽分子量Marker适用范围广，预染发光Western Marker适用于Western Blot检测。不同Marker适
2026-03-06 15:59:21
407
原创 神经退行性疾病概况
神经退行性疾病是由于神经元及其髓鞘丧失导致的神经元功能障碍，表现为运动障碍、认知下降等症状。常见疾病包括阿尔茨海默病（Aβ斑块、Tau蛋白异常）、帕金森病（α-突触核蛋白积聚）、亨廷顿病（突变亨廷顿蛋白）等。关键特征涉及蛋白质错误折叠、突触功能障碍、神经炎症和能量代谢异常。研究思路包括靶点确认、模型构建（细胞/动物模型）、行为学测试和病理检测。这些疾病的复杂性提示需要多靶向治疗策略。
2026-02-28 15:25:32
490
原创 TR-FRET热门应用介绍
TR-FRET（Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer，时间分辨荧光共振能量转移）是一种用于研究分子间相互作用的生物物理技术。它结合了两种技术：荧光共振能量转移(FRET)和时间分辨荧光（TRF，Time-Resolved Fluorescence）。荧光共振能量转移是一种物理现象，其中一个荧光分子（供体）在吸收光能后，可以将激发能量非放射性地传递给另一个分子（受体），如果受体在空间上足够接近供体（通常在1-10nm范围内）
2026-02-28 13:55:40
611
原创 多色荧光免疫组化和多色流式傻傻分不清？
摘要：多色荧光免疫组化(mIHC)与多色流式(FCM)是生物医学研究的两种关键技术。mIHC基于酪胺信号放大技术，适用于组织样本的多靶点原位分析，在肿瘤微环境研究和免疫治疗评估中优势显著。FCM通过激光激发荧光标记进行单细胞多参数分析，广泛应用于细胞生物学和肿瘤免疫状态评估。两者在样本要求、分析层次和应用领域存在明显差异：mIHC需要固定组织切片，强调空间定位；FCM要求活细胞悬液，侧重细胞水平检测。科研人员需根据研究目标选择合适技术。
2026-02-27 09:32:33
302
原创 DC细胞培养攻略
摘要：树突状细胞（DC）是功能最强的抗原提呈细胞，1973年由Steinmen和Cohn首次发现。DC来源多样，包括骨髓CD34+细胞、外周血单核细胞及iPSC/ESC诱导生成。不同来源的DC通过特定细胞因子组合诱导分化，形成多种亚型。DC在抗肿瘤免疫中起核心作用，其功能受损可能导致免疫逃逸。研究方法包括流式分析、质谱流式和单细胞测序等，用于探索DC亚型特征及其在肿瘤微环境中的作用。DC疫苗、DC-CIK疗法等是当前研究热点。（148字）
2026-02-27 09:22:50
540
原创 Glass gel磷酸化蛋白预制胶
蛋白磷酸化是重要的蛋白质翻译后修饰过程，由蛋白激酶催化，在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基上添加磷酸基团。它在细胞信号传导、周期调控和疾病发生中起关键作用，与癌症等多种疾病相关。常用的检测方法包括免疫印迹、质谱分析和ELISA等。新技术Phos-isoSDS-PAGE通过金属络合物特异性结合磷酸基团，实现磷酸化与非磷酸化蛋白的分离，具有操作简单、无需磷酸化抗体等优势，但需注意样品处理和电泳条件优化。该技术为蛋白质磷酸化研究提供了新工具。
2026-02-25 09:20:01
570
原创 转染详解！分类/步骤/细胞类型，一网打尽！
本文系统介绍了转染技术的概念、分类、应用及操作流程。转染是指将外源DNA或RNA导入细胞的技术，可分为DNA/RNA转染、稳定/瞬时转染、化学/物理/病毒转染等多种类型。该技术在基因功能研究、基因治疗、药物开发等领域应用广泛。文章详细阐述了转染实验的具体步骤，包括细胞准备、载体构建、转染操作及效果验证等关键环节，并介绍了siRNA、miRNA、mRNA等不同核酸分子的转染特点。最后列举了HEK293、HeLa等常用转染细胞系的特点。转染技术为生命科学研究和医学应用提供了重要工具。
2026-02-25 09:14:42
580
原创 为啥类器官传代后基本不长呢？
类器官传代失败原因分析：1. 操作因素：基质胶冷化条件（温度/时长）、离心参数（转速/温度）、消化过程（酶活/时间）、吹打力度等关键步骤不当易损伤类器官。2. 样本特性：不同类器官活性差异大（如肠癌易培养，肝癌难培养），原代数量过少也会影响传代成功率。3. 培养体系：培养基/消化液/基质胶储存不当（4℃超过2周）会导致活性成分降解，尤其对干性下降的传代类器官影响显著。建议优化操作细节并使用新鲜试剂以提高传代成功率。
2026-02-24 09:26:06
478
原创 分子互作研究
本文概述了多种研究生物分子相互作用的技术方法：ChIP技术用于分析蛋白质与DNA结合位点；DNA pull-down通过标记探针检测DNA结合蛋白；RIP技术研究RNA-蛋白复合物；RNA pull-down鉴定RNA结合蛋白；CoIP通过抗体富集目标蛋白及其互作分子；GST Pull-Down利用融合蛋白检测蛋白互作。这些技术在基因调控、转录后修饰和信号通路研究中具有重要应用价值。
2026-02-24 09:21:45
473
原创 连接“为什么”与“怎么办”--外泌体驱动的基础临床双飞跃
外泌体研究已成为国自然资助热点，这些纳米级囊泡在疾病诊疗中展现出巨大潜力。研究发现外泌体通过独特机制参与细胞通讯，可作为肿瘤等疾病的早期标志物，其药物递送系统能克服传统疗法局限。外泌体还能调控免疫微环境，新技术如类器官芯片和AI正推动研究深入。尽管临床转化仍面临标准化、规模化生产等挑战，但外泌体在精准医疗领域前景广阔，未来研究将聚焦机制探索与技术创新突破。
2026-02-13 10:04:18
506
原创 流式细胞术从零开始说
流式细胞术是一种高效分析单细胞多参数的技术，通过激光激发细胞产生的散射光和荧光信号进行检测。其核心系统包括液路系统（保证单细胞流）、光路系统（激发和收集光信号）及电子系统（信号转换与分析）。该技术可检测细胞大小、颗粒度、荧光标记物等，并利用FSC/SSC参数区分细胞群。通过荧光染料如FITC Annexin V/PI可分析细胞凋亡。多色流式需配置多种激光器和滤光片系统，电子系统则负责信号放大、模数转换及数据分析。样本制备阶段需注意去除细胞粘连体以保证数据准确性。
2026-02-13 09:55:13
619
原创 铁死亡的“潘多拉魔盒”：开启疾病治疗新世界的钥匙何在？
铁死亡研究已成为国家自然科学基金的热点领域。作为一种铁依赖性细胞死亡方式，其核心机制涉及GPX4抗氧化系统、SystemXc-转运体和脂质代谢三大调控网络。铁死亡在癌症治疗中展现出克服耐药性和协同免疫治疗的潜力，同时在神经退行性疾病和缺血再灌注损伤中抑制铁死亡具有保护作用。当前研究面临检测技术标准化、体内调控复杂性和转化医学等挑战。未来研究需深入探索调控机制，开发特异性检测方法和转化应用，为疾病诊治提供新策略。该领域创新性强，具有重要的科学价值和临床意义。
2026-02-12 09:40:04
574
原创 神经细胞标志物一览
神经细胞研究对理解大脑功能和神经系统疾病治疗具有重要意义。主要包括神经元（传递电信号，标记物如NeuN、TUBB3）和神经胶质细胞（数量占优，包括星形胶质细胞GFAP标记、少突胶质细胞MOG标记、小胶质细胞TMEM119标记、施旺细胞GAP43标记）。神经干细胞（标记物如Nestin）具有分化潜能。这些细胞的标志物为神经科学研究提供了重要工具。
2026-02-12 09:26:54
344
原创 ADC药物研发解决方案
抗体偶联药物(ADC)是一种通过连接子将抗体与细胞毒性载荷结合的新型靶向抗癌药物。ADC由三大关键元件组成：特异性抗体、毒素分子和可裂解/不可裂解的连接子。其研发需综合考虑靶点选择、抗体亲和力、连接子稳定性及偶联技术等因素。目前常用的靶抗原包括HER2、CD19等，抗体多采用IgG1亚型，细胞毒性载荷主要为微管抑制剂和DNA损伤剂。连接子分为可切割和不可切割两类，偶联方式包括非定点和定点偶联。ADC具有"生物导弹"特性，能精准递送毒素至肿瘤细胞，但也面临脱靶毒性、产品不均一等挑战。
2026-02-10 10:19:14
512
原创 多重荧光免疫组化 | T细胞分型
摘要：T细胞是免疫系统中重要的异质性细胞群，通过抗原特异性受体识别病原体。根据TCR类型、共刺激分子、功能和活化阶段可分为多种亚群。T细胞活化需要抗原刺激信号和共刺激信号双重作用，并依赖细胞因子促进增殖分化。T细胞表面表达多种受体因子（如TCR、CD3、CD4/CD8、共刺激分子等）参与免疫应答。主要亚群包括杀伤性T细胞（CD8+）、辅助T细胞（CD4+）和调节性T细胞（Treg），分别执行细胞毒性、免疫调节和免疫抑制功能。这些受体和亚群的协同作用对维持免疫平衡至关重要。（149字）
2026-02-10 10:13:33
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