17、纸基分子诊断技术：现状与进展

纸基分子诊断技术：现状与进展

1. 纸基核酸直接检测及其局限性

在纸基分子诊断领域，曾有利用金纳米颗粒形成的浓缩环进行比色检测RPA扩增子的研究，这表明RCA反应成功。长单链DNA寡核苷酸与金纳米颗粒探针序列互补，阻止其在纸膜中分散。然而，这些直接在纸膜上检测核酸的方法存在诸多缺点，比如步骤繁多、耗时较长。因此，开发一种能够捕获、扩增和检测核酸的改进装置迫在眉睫。

2. 纸芯片用于核酸扩增与检测

2.1 等温扩增技术受关注

近年来，核酸的等温酶促扩增技术备受瞩目。它具有恒定的孵育温度、快速的扩增速率，且无需热循环仪进行扩增等优点。常见的等温扩增技术包括LAMP、RPA、HDA、RCA和SDA等，这些技术常用于溶液基核酸扩增。纸基质常被用于通过等温技术进行核酸扩增，不仅可用于核酸提取，还能实现同时扩增和检测。

2.2 不同研究案例

• HDA反应 ：Shetty等人报道了在Whatman 1号色谱纸上使用HDA快速扩增结核分枝杆菌（MTB）DNA。准备好的纸基质通过简单添加HDA反应试剂，然后风干并冷藏备用。在风干的纸基质上加入纯化的细菌基因组DNA和HDA试剂，即可启动HDA反应。扩增的HDA产物通过PicoGreen染料产生的荧光信号进行检测，该染料在纸基质上的检测效果优于碘化丙啶、DAPI和Sybr Green I。
• 纸芯片LAMP检测 ：有研究团队展示了基于纸芯片的LAMP检测方法，用于检测三种不同类型的脑膜炎细菌。将LAMP反应混合物（如引物、DNA聚合酶、检测染料和稳定剂）风干在玻璃纤维基质