在讲解肺炎双球菌转化实验的时候,师生往往面临着如下几个疑问,试解答如下:
①加热能杀死细菌,却为何“杀不死”DNA?
对S型细菌加热到一定程度(60度到100度),其蛋白质的分子结构受到破坏而丧失生物活性,加热引起的蛋白质变性是导致S型细菌死亡的原因。被加热杀死的S型细菌通过自溶过程,释放出部分DNA片段,但60度到100度高温只能使DNA氢键断开,双螺旋解体,而不会引起DNA分子的降解和一级结构的破坏。由于碱基互补作用,当温度逐渐降低后,分离的DNA单链会重新聚合,双螺旋结构又重新恢复。因此在一定温度范围内,加热不会导致DNA“死亡”(变性)。
②荚膜为何?是否有毒?
荚膜是某些细菌在一定条件下或生长发育到某一阶段时,在细胞壁外一层厚度不均的胶状物。具有保护细菌免受干旱损伤,可以贮藏养料,堆积代谢产物,与细菌致病性有关。产生荚膜细菌在固体培养基上形成表面湿润、有光泽、粘液状的光滑型(smooth),即S型菌落。不产生荚膜的细菌表面干燥、粗糙型(rough),即R型菌落。
用特异性水解荚膜的酶除去荚膜,细菌的生命活动不受影响。荚膜有自身保护功能:①荚膜富含水,可保护细菌免受干燥,大部分细菌的荚膜由多糖组成;②能抵御吞噬细胞的吞噬和其他物质的侵害;③荚膜为主要表面抗原,它是有些病菌的毒力因子,故S型肺炎双球菌靠其荚膜致病,而无荚膜的R型为非致病菌。此外荚膜是聚合物,所以也是细菌的一种贮藏性物质,可在营养缺少时动用,产生荚膜与否是细菌的一种遗传特性,并与环境条件密切相关。从荚膜的功能第②点可知,S型细菌进入吞噬细胞后,由于荚膜的保护,能抵抗吞噬和消化作用,从而迅速繁殖、扩散,引发机体发生疾病,严重时会引起死亡;而R型细菌无荚膜,会被吞噬细胞吞噬、消化,所以不能使机体患病。可见,荚膜并没有毒性,是一种毒力因子。好比荚膜为刀,刀是凶器,但不是凶手。
③何为转化?转化过程如何?
受体细胞从外界直接吸吸收来自供体细胞的DNA片段,并与其同源片段进行遗传物质交换,从而使受体细胞获得新的遗传特性的现象,称为转化。
供体细胞DNA片段即为格里菲斯认为的“转化因子”,R型细菌肺炎双球菌(受体细胞)在对数期后期(生长后期)40分种内处于“感受态”,吸收外源DNA的能力比其它时期大1000倍。此时R型活菌(受体细胞)膜表面有30~80个“感受态因子”位点。“感受态因子”是一种膜外蛋白,可以催化外来DNA片段的吸收或降解细胞表面某种成分,从而使细胞表面的DNA受体显露出来。被加热杀死的S型肺炎双球菌自溶,释放出的DNA片段(已失活),但双键结构尚在,分子量小于1×107含有15个基因,即“转化因子”。当“转化因子”遇到咸受态的R型活菌,就有10个左右这样的双链片段与R型菌膜表面的“感受态因子”位点结合,在位点上进一步发生酶促分解,形成平均分子量为4×106~5×106的DNA片段,然后双链拆开,其中一条链降解,另一条单链进入细胞,与受体菌基因的相应同源区段配对,并使受体菌基因的相应片段被切除,从而将其替换,形成杂种DNA区段。随着受体基因进行复制,杂合区段分离成两个,其中之一类似供体菌,另一个类似受体菌。当细胞分裂后,复制的基因发生分离,于是就有R型菌产生S型菌肺炎双球菌的后代,此过程称为原核生物的转化。其实质是基因重组。
④如果感染了S型肺炎双球菌,S型菌的DNA能不能进入人或小鼠的细胞?
在某些化学或物理条件的诱导下,外源DNA可以比较容易地进入真核细胞,这一过程称为转染。可是在生理条件下,外源DNA进入细胞之前就被机体组织内的各种核酸酶彻底水解和破坏了,即使有少量核酸没有被完全水解,也无法通过正常途径穿过细胞膜,进入细胞内并运送到核。另外,发生转化的生物间必须有一定的亲缘关系,肺炎双球菌的S型和R型是同一物种的两个品系,较易发生转化,细菌与人或小鼠之间的亲缘关系较远,几乎不能转化。
⑤格里菲思要做第四组实验的用意何在?
1928年,格里菲斯将肺炎球菌SⅡ在特殊条件下进行离体培养,从中分离出R型,说明R型是SⅡ的突变型。当他把这种R型的少量活细菌和大量已被杀死的SⅢ混合注射到小家鼠体内以后,出乎意外,小家鼠却被致死了。剖检发现,小家鼠的心血中有SⅢ细菌。这一实验结果可以有三种解释。(1)SⅢ细菌可能并未完全杀死。但这种解释不能成立,因为单独注射经过处理的SⅢ时并不能致死小家鼠。(2)R型已转变为S型。这一点也不能成立,因为剖检发现的是SⅢ不是SⅡ,R型从SⅡ突变而来,理应转化为 SⅡ。(3)R型从杀死的SⅢ获得某种物质,导致类型转化,从而恢复了原先因基因突变而丧失的合成荚膜的能力。格里菲斯肯定了这种解释。这就是最早发现的转化现象。从格里菲斯所做的实验的真实的过程中,我认为为什么格里菲思要做第四组实验的原因是,S型菌能突变成R型菌,那么R型菌能否变成S型菌呢?有什么办法能让R型菌变回S型菌呢? 并且由于实验结果发现的是SIII型而不是SII型说明这种转变并不是突变而是转化。