高通量筛选菌种与理性设计改造酶的性质的方法如下:
(1)高通量筛选技术随着计算机技术、生物信息学和电子器械的发展,应用 机械手每天可以处理成百上千甚至几十万上百万的样品分析。这极大地加快了酶 的筛选过程。然而高通量筛选中的潜在问题是为了快速、短时间能处理大量样品, 在分析方法上要做某些妥协以适应这种快速响应,如用人工底物代替工业上真正 的底物来进行快速反应。
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高通量筛选菌种与理性设计改造酶的性质的方法如下:
(1)高通量筛选技术随着计算机技术、生物信息学和电子器械的发展,应用 机械手每天可以处理成百上千甚至几十万上百万的样品分析。这极大地加快了酶 的筛选过程。然而高通量筛选中的潜在问题是为了快速、短时间能处理大量样品, 在分析方法上要做某些妥协以适应这种快速响应,如用人工底物代替工业上真正 的底物来进行快速反应。
这样的做法对于不溶性底物,如淀粉和纤维素,在筛分生 料酶和纤维素酶方面就产生很大问题。如果用不溶性底物,反应的均匀性就难以 控制。另外的问题是,这种高通量筛选方法的确定是基于酶制剂的某一性质而着 眼,因此就可能错失很多其他重要的信息。就像运动员的筛选一样,在短跑上达不 到顶尖水平的运动员,有可能在跳远或跨栏上有成就。
酶制剂也一样,在某些条 件、某种底物表现不好,可能在合适的应用条件下却是“明星”。要发现这样的“千 里马”,更主要地要靠应用试验。
常规的筛选方法处理不了大数量的化合物和靶分子,在菌种筛选中费时费力。 高通量筛选技术应运而生,并伴随着组合化学、微芯片技术、荧光检测技术和基因 组学的发展而不断发展。
目前该技术在药物筛选中应用较为广泛,每天可筛选的 靶分子数从1997年的不到3000达到了现如今的10万多个。据待测样品的种类, 可分为非细胞相筛选、细胞相筛选和生物表型筛选。高通量技术的发展,极大地提 高了对目标分子、活性物质等的筛选质量,目前该技术正向着高内涵筛选技术发 展。
该技术是生物学、分析软件、自动化控制以及纤维观测技术最新发展的综合应 用,微型化、自动化、高效化、低廉化和微量化成为目前的研究热点。同时,在完善 高通量菌种筛选平台的基础上,必须建立相应的菌种库和基因库。
(2)理性设计蛋白质工程理性设计需要对酶蛋白分子的三维空间结构和催 化机制有非常充分的了解,通过改变个别氨基酸而对酶的结构进行精确的调控,从 而获得具有所需催化活性的新酶。
与“定向进化”相比,理性设计目的性更强,更 为高效和快捷。典型的成功例子:耐高温的、低pH的淀粉酶,抗高浓度漂白剂 的蛋白酶等。
酶的理性设计方法主要分为两种:基于实验结果的设计和计算机辅助设计。 前者主要针对活性中心进行人为改造;近来随着计算机技术和生物信息学的发展, 计算机辅助设计已经成为酶的理性设计的主要发展方向,尤其近期在酶的从头设 计方面取得了一系列重要进展。
事实上,实际应用中两种方法在新酶的发展过程中通常是互补的。酶的理性 设计只有对酶分子催化机制的理解和空间结构的整体把握后才可以进行,因此,虽 然“定向进化”这样的非理性设计方法操作相对繁琐且目的性不强,但依然是获得 新酶的主要方法。对直接进化结果中有益突变进行分析有利于加深对酶分子催化机制的理解,为进一步理性设计提供了条件,丰富了新酶设计的思路。
相信未来理 性设计方法与非理性方法的继续相互融合与发展,会更快地得到更好的酶分子。
关于这方面的介绍,国内外有不少很好的综述可供参考,曲音波等对于纤维素 酶的发现和改造也有很详细的讨论,在这里不再赘述。
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