本文介绍了分子实验中探针引物设计的基本原则，包括探针和引物的设计指导、循环参数的选择以及优化浓度的方法。强调了保持GC含量适中、避免重复序列和设计合适Tm值的重要性。此外，还探讨了绝对定量和相对定量的分析方法。
对于做分子实验的人来说，探针引物，一个很熟悉的词语，科研人员也会经常用到，但是对于探针引物的设计，您知道多少？今天，我们就简单的谈下这种引物的设计。
通用原则
1. 先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近于探针；
2. 扩增子的长度应不超过400bp，理想的最好能在100－150bp内，扩增片断越短，有效的扩增反应就越容易获得，较短的扩增片断也容易保证分析的一致性；
3. 保持GC含量在20％和80％之间，GC富含区容易产生非特异反应，从而会导致扩增效率的降低，及在SG分析中非特异信号；
4. 为了保证效率和重复性，应避免重复的核苷酸序列，尤其是G(不能有4个连续的G)；
5. 将引物和探针互相进行配对检测，以避免二聚体和发卡结构的形成。
探针设计指导
1. 在设计引物之前设计探针；
2. 探针的Tm值应在68－70℃之间，如果是目测探针，则要仔细审查GC富含区；
3. 探针的5’端要避免有鸟氨酸，5’G会有淬灭作用，即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在；
4. 选择C多于G的链作探针，G的含量多于C会降低反应效率ÿ
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