近期多位同学有共定位分析的实验需求,今天和大家聊一聊如何使用我平台的共聚焦显微镜Zeiss LSM780/880进行共定位实验。
实验要求
1、所要分析的两种共定位染料不能有串色。
减少串色的手段包括:
在选择染料时尽量选择激发和发射都离得比较远的染料;
在拍摄时使用顺序扫描并适当调整接收范围;
必要时使用光谱拆分。
2、设置通道时,两通道使用相同的Pinhole大小。Pinhole不同会导致两通道的光切厚度不同,进而使信号的空间定位有偏差。
3、荧光亮度不能过曝。所有定量分析的实验都要求信号不能过饱和。
4、使用平场复消色差物镜来拍摄,并且尽量选择数值孔径高的镜头。
如何进行共定位实验
1、准备两种单标样品和待分析的共定位样品。
2、使用相同的参数分别拍摄三种样品,得到三张图片。
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