酶促反应动力学_酶促反应的动力学.ppt

酶促反应的动力学

酶促反应动力学 酶反应动力学：是研究反应速度规律以及各种因素对酶反应速度影响的科学。 研究酶反应速度的规律和各种因素对酶反应影响的科学。 已经知道酶反应动力学，比化学反应动力学复杂得多，其复杂性可以从酶的反应体系看出。 绪论 酶反应动力学体系 一、最简单的均相反应系统： 1、零级反应： 2、一级反应 二、均相可逆反应系统： 四、均相双分子可逆反应系统： 六、均相连续反应系统： 第一节 酶促反应动力学 一、前稳态酶促反应动力学 (一)稳态和前稳态 酶(E)促单底物反应: 反应历程: 在最初极短反应时间(t1)内, [P]极低, 逆反应(E+P→S)可以忽略不计.因此: ES(酶-底物复合物)生成速度 ES分解速度= ES净生成速度 =ES生成速度-ES分解速度 (二) 前稳态动力学与稳态动力学的比较 二、单底物酶促反应稳态动力学 (一)米氏方程的推导 (二)米氏方程的物理意义 1.提供了两个极为重要的酶反应动力学常数Km和可擦他kcat并通过他们表达了酶反应性质、反应条件和酶反应速度之间的关系。 Km的物理意义： ⑴特定的反应，特定的反应条件下，Km是个特征常数，可部分描述酶反应性质、反应条件对酶反应速度的影响。故可用来鉴别不同的酶。 ⑵1/Km表示酶与底物的亲和力，Km越大，亲和力越小，反之越大。 ⑶当v=V/2时，Ks=[S]。表明Km相当于反应达到最大速度一半时的底物浓度，或者说，相当于要使反应系统有一半的酶分子参加反应所必须具有的底物浓度。 ⑷通过Km可判断酶的最适底物，因为最适底物具有最大的V/Km。 ⑸通过Km可了解酶的底物在体内可能具有的浓度水平。一般酶<>Km,那么v≈V，[S]将失去其生理意义。 ⑹通过体外测定某些物质对Km的影响，可以推断出该物质可能有的生理效应，如作为抑制剂或活化剂等。 (三)酶活力单位和比活力 一个标准单位：在特定的条件下(25℃，pH、底物浓度等其他条件均为最适条件)，1分钟能转化1微摩尔底物所需的酶量。 酶的比活力(specific activity)：每毫克蛋白所含的酶单位数，用U/mg蛋白表示。 (四)酶的转换数 1.分子活性定义：在最适条件下，每摩尔酶每分钟所转变的底物摩尔数(即每摩尔酶的酶单位数)。 2.对于寡聚酶：在最适条件下，每摩尔活性亚基或催化中心每分钟所转变的底物摩尔数。 3.用min-1表示。 4.kcat=Vmax/[Et] (五)米氏方程对酶反应速度和底物浓度间关系的描述 米氏方程概括的这些规律和绝大多数实验结果一致，但少数情况下产生异常。例如，1/v对1/[S]作图时，一般应该得到线性图形，但有时也会产生偏差，原因可能为： (A)可能是由于高底物浓度引起的抑制； (B)可能是由于高底物浓度引起的活化： (C)和(D)，可能是由于分析操作上的误差； 在实际工作中，反应系统使用适当的底物浓度非常重要。 用动力学方法进行酶活性测定，或进行底物以外其他因素测定时，为避免同时夹杂其他因素的影响，最好使用足够高的底物浓度，使反应呈零级反应状态。 进行底物本身的测定时，应使反应速度直接比利于底物浓度，即使系统处于一级反应状态。 (六)米氏方程其他表达形式及作图法 1. 此表达式对应的图形为v~[S]作图， Km=V/2。 ⑴很难准确地画出矩形双曲线； ⑵很难画出渐近线； ⑶误差不易察觉； 2. 该式对应的图形为1/v~1/[S]作图，称为Lineweaver-Burk作图或双倒数作图。 ⑴点分布不均匀，集中于1/v轴，不过，此缺点可通过适当选择 [S]克服。 ⑵误差放大。在低[S]时，v很小，本身就容易产生误差；而化成1/v与1/[S]后，误差显著放大。 3. 相应的作图为[S]/v~[S]，称为Hanes作图。 优点：点分布均匀； 缺点：由于取]1/v，使误差放大，但比较一致，一般认为适用于常数测定。 4. 对应图形为v~v/[S]，称为Eadie-Hofstee作图。 缺点是分布不均，但无误差放大，可信度高，更大的优点是各种因素的影响可在影响上表现出来。故现在很受人们重视。 5. 此式可以v~log[S]作图，但通常少用，只有当[S]变化很大，v变化较小时，这种方法才有优点。 6. 可用(2.3/t)log([S]0/[S])~( [S]0-[S])/ t作图。但这一方法仅仅用于不能测定初速度的情况。 应用作图法测定动力学常数时应注意的两个问题： 1.最好使用接近Km的[S]，否则不能得到准确结果，因为： ①用Lineweaver-Burk作图时，如果[S]>> Km,曲线基本水平，斜率近于0；如果[S]<< Km,则曲线