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科研工作离不开抗体,WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗体,那么这几种实验方法中的抗体有什么区别呢?实验做不出来,您的抗体选对了么?
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抗体选择第二弹,WB、IHC、ChIP...你的抗体选对了吗?
一、关于特异性的选择
特异性的选择主要需要考虑四个方面:蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。
1、蛋白特异性
针对需要检测的蛋白查找抗体,几个细节要区分:
a.重组蛋白如果不是全长表达,则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。
b.内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式,特殊表型的蛋白需要进行序列比对,并结合抗体免疫原序列,查看交叉反应的情况。
c.磷酸化蛋白检测需要确定具体位点,不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在,不宜一概而论。
2、种属特异性
同种蛋白不同物种,有着或大或小的差异。
a.目前大部分商品化抗体都是以人源蛋