标签蛋白_His标签蛋白纯化全面解决方案

His-Tag融合蛋白常用于蛋白表达,因其方便且不影响活性。IMAC纯化技术利用Ni2+-NTA填料吸附His标签蛋白,尤其适用于含有组氨酸的蛋白质。文章讨论了纯化过程中可能遇到的问题,如不结合、洗脱困难、杂质多等,并提供了解决方案。此外,还提到了不同镍填料的特性和适用场景。

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03453572aaf68e69af9b2d0ad46b8cb8.gif 6b0d2dd704dda69a0ee32cdda7b4e37a.png精彩推荐 蛋白纯化手册已发布 点击下面连接查看【经典版】最全蛋白纯化手册    觉的不错就点亮文末右下角的“好看”,并分享到朋友圈哦!组氨酸标签蛋白简介

His-Tag融合蛋白是目前最常见的蛋白表达方式,而且很成熟,它的优点是表达方便而且基本不影响蛋白的活性,无论是是可溶性表达的或者包涵体都可以用固定金属离子亲和色谱去(IMAC)纯化。IMAC是Porath et al.1975年用固定IDA作为配基的填料螯合过渡金属铜、镍、钴或锌离子,可以吸附纯化表面带组氨酸、色氨酸或半胱氨酸残基的蛋白。1987年Hochuli et al.发现带有相连组氨酸的多肽和Ni2+-NTA填料作用力更强于普通的肽,1988年他第一次用这样的方法纯化了带六个组氨酸标签的多肽,无论是在天然还是变性条件下一次亲和纯化都得到很好效果,此后表达带六个组氨酸标签的蛋白配合IMAC变得非常普遍,相对而言,不带标签的蛋白纯化就非常困难,所以表达带六个组氨酸标签的蛋白配合IMAC纯化变成最常用而且最有效的研究蛋白结构和功能的有力手段。

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