作为基础实验的老客户,小王子不得不说一句公道话:qRT-PCR的结果处理起来真是头大!!!那么,有没有其他比较简便的方法可以供我们使用呢?这里,小王子给大家推荐两种比较常用的计算方法。
一、导出结果里的CT值是什么意思?
欲理解qRT-PCR中的CT值,我们先回顾一下其扩增原理,PCR的扩增,简单来说就是指数增长,也就是1变2,2变4,4变8...与此同时反应管内的荧光信号也逐渐变强,当达到我们设置的阈值时,机器会记录各个反应管内所经历的循环数,这也就引出了我们的CT值:每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数 (cycle)。我们用的荧光染料与双链DNA结合后荧光大大增强,所以我们可以理解为荧光强度跟DNA含量成正比。由于到达同一个阈值,我们得出到达阈值时其终产物量一致,所以不难推断出CT值越小,其扩增所需循环数越少,目的基因的模板量越高。
基于第一部分CT值的意义,我们可以对目的基因的相对表达量进行以下推导: