在细菌中表达人胰岛素样生长因子I：使用优化的基因融合载体以促进蛋白质纯化...

汤義喆

于 2024-07-25 13:48:25 发布

阅读量331

点赞数 3

文章标签： IGF-I 大肠杆菌金黄色葡萄球菌蛋白A 融合蛋白羟胺裂解

本文链接：https://blog.csdn.net/weixin_42717586/article/details/140687850

版权

研究背景

基于金黄色葡萄球菌蛋白A基因的融合载体的构建和使用以前已有描述。表达系统基于免疫球蛋白恒定区和金黄色葡萄球菌蛋白A之间的“伪免疫”相互作用。最近，系统得到了改进，证明了仅含两个(EE或EB)金黄色葡萄球菌蛋白A的五个(E, D, A, B和C)IgG结合域的融合蛋白在大肠杆菌的生长介质中分泌。在本研究中，我们比较了不同的细菌表达哺乳动物肽激素的系统，并基于合成的IgG结合域(Z)提出了一个优化版本。

研究主旨

本文介绍了一种优化的大肠杆菌表达系统，用于生产人胰岛素样生长因子I(IGF-I)，通过构建融合蛋白，利用IgG亲和纯化技术进行有效纯化。研究中使用了三种不同的融合载体，分别含有不同数量的金黄色葡萄球菌蛋白A的IgG结合域，通过羟胺处理实现特异性裂解，释放出高活性的IGF-I。最终产品通过多种分析方法验证其生物活性和纯度。

研究特点

组装并比较了几种人胰岛素样生长因子I(IGF-I)基因与不同金黄色葡萄球菌蛋白A的IgG结合片段之间的融合，研究了肽激素的表达、分泌和纯化。从金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的培养基中通过IgG亲和纯化融合蛋白后，通过羟胺裂解Asn-Gly肽键释放出原生IGF-I。基于修改后的合成IgG结合域(z)，构建了一个优化的表达系统，该系统对羟胺具有抗性，从而获得了最高的融合蛋白产量。裂解后，激素可以通过第二次通过IgG亲和柱从IgG结合部分和未裂解的融合蛋白中分离出来。通过放射受体测定、N端序列分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦和高效液相色谱法确认了获得的IGF-I的生物活性和纯度。