Biotin-SS-NHS ester 是一种常用的生物素化试剂,广泛应用于蛋白质、抗体、核酸等生物分子的标记和偶联。它包含一个生物素基团、一个可切割的二硫键(SS)和一个N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS ester)反应基团。NHS ester 可以与伯胺基团(如赖氨酸的ε-氨基)反应,形成稳定的酰胺键,从而实现生物分子的生物素化。二硫键的存在使得标记物在还原条件下可以被切割,便于后续的分离或分析。
主要特性
- 生物素基团:用于与链霉亲和素或亲和素结合,实现高亲和力的检测或纯化。
- 二硫键(SS):可在还原剂(如DTT或β-巯基乙醇)作用下断裂,释放生物素化分子。
- NHS ester:与伯胺基团反应,形成稳定的共价键。
结构式:
应用领域
- 蛋白质标记:用于蛋白质的生物素化,便于后续的亲和纯化或检测。
- 抗体标记:用于抗体的生物素化,应用于免疫检测技术(如ELISA、流式细胞术)。
- 核酸标记:用于核酸的生物素化,应用于杂交实验或测序技术。
- 细胞表面标记:用于细胞表面蛋白的生物素化,研究细胞表面受体或信号通路。
使用方法
- 溶解试剂:将 Biotin-SS-NHS ester 溶解于无水 DMSO 或 DMF 中,配制成适当浓度的储存液。
- 反应条件:将储存液加入含有目标分子(如蛋白质、抗体)的缓冲液中,通常在 pH 7.2-8.5 的缓冲体系中进行反应,反应时间一般为 30 分钟至 2 小时。
- 纯化标记物:通过透析、凝胶过滤或亲和层析等方法去除未反应的试剂。
- 还原切割:在需要时,使用还原剂(如 DTT)切割二硫键,释放生物素化分子。
同系列:
NO-(COOt-Bu)2
NODA-GA-NHS ester
MeTz-PEG7-NOTA
MeTz-PEG11-NOTA
Me-Tetrazine-PEG11-NOTA
2-[4-(2-hydroxyethyl)-1,4,7-triazonan-1-yl]ethan-1-ol
NCS-MP-NODA
3p-C-NETA-oxa-(tBu)-butanoic acid
(S)-NOTA-GA-(COOt-Bu)3
2C-p-NOTA-NCS
p-NOTA-NCSA
2C-p-NETA-NCS-Fmoc-D-赖氨酸
NOTA-p-NCSA-amine-PEG8-azido
NOTA-p-NCSA-DBCO-amine
NOTA-p-NCSA-Fmoc-D-赖氨酸