Biotin-bisamido-SS-NHS ester 是一种生物素化试剂,常用于蛋白质、抗体或其他生物分子的标记。它包含一个可切割的二硫键(SS),使得标记后的分子在特定条件下(如还原环境)可以被释放。这种试剂通常用于生物偶联实验,如免疫沉淀、亲和纯化或细胞表面标记。
化学结构
Biotin-bisamido-SS-NHS ester 的化学结构包括以下部分:
- 生物素(Biotin):用于与亲和素(如链霉亲和素)结合。
- 二硫键(SS):提供可切割的连接。
- NHS酯(NHS ester):与目标分子中的氨基(如赖氨酸残基)反应,形成稳定的酰胺键。
结构式:
应用
Biotin-bisamido-SS-NHS ester 的主要应用包括:
- 蛋白质标记:将生物素标记到蛋白质上,用于后续的亲和纯化或检测。
- 抗体标记:用于免疫分析,如 ELISA 或 Western blot。
- 细胞表面标记:标记细胞表面的蛋白质,用于流式细胞术或显微镜观察。
使用方法
- 溶解试剂:将 Biotin-bisamido-SS-NHS ester 溶解在无水 DMSO 或 DMF 中,确保浓度适当。
- 反应条件:将溶解后的试剂与目标分子(如蛋白质或抗体)在 pH 7-9 的缓冲液中混合,通常在 4°C 或室温下反应 1-2 小时。
- 纯化:通过透析或凝胶过滤去除未反应的试剂和副产物。
- 还原切割:如果需要释放标记的分子,可以使用还原剂(如 DTT 或 TCEP)处理,切断二硫键。
注意事项
- 储存:Biotin-bisamido-SS-NHS ester 应储存在干燥、低温(-20°C)条件下,避免受潮和光照。
- 反应效率:确保目标分子中有足够的游离氨基,以提高标记效率。
- 还原条件:在还原切割时,注意控制还原剂的浓度和反应时间,以避免对目标分子的损伤。
同系列:
DTPA-tetra (t-Bu ester)
Maleimido-mono-amide-DTPA
Deferoxamine-DBCO
Deferoxamine-maleimide
p-SCN-Bn-Deferoxamine
DBCO-PEG3-Deferoxamine
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CB-Cyclam
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