ICG-NHS(吲哚菁绿-活性酯)是一种常用的荧光染料,它可以通过与含有胺基的生物分子(如蛋白质、抗体等)发生反应,实现共价标记。以下是ICG-NHS的使用方法步骤:
1. 准备ICG-NHS溶液:首先,将ICG-NHS溶解在适当的有机溶剂中,如二甲基亚砜(DMSO)或二甲基甲酰胺(DMF),以制备成所需浓度的工作溶液。
2. 调整反应条件:在碱性条件下,通常使用碳酸氢钠缓冲液调整pH值至8-9,以激活ICG-NHS的NHS酯基团,使其能够与生物分子中的胺基反应。
3. 进行标记反应:将ICG-NHS溶液与待标记的生物分子溶液混合,反应时间根据实验需要可在几分钟到几小时之间进行。
4. 纯化和去除副产物:反应完成后,通过柱层析、凝胶过滤等方法去除未反应的ICG-NHS和可能产生的副产物。
5. 鉴定和表征:使用光谱分析技术(如紫外-可见光谱、质谱等)对标记后的产物进行鉴定和表征,以确认标记的成功与纯度。
6. 储存:标记后的生物分子应在避光和低温条件下储存,以保护荧光信号不衰减。
在使用ICG-NHS进行实验时,应注意控制反应条件,避免光照和高温,以保持荧光染料的稳定性和活性。此外,应根据实验的具体要求和生物分子的特性进行优化实验条件。