饲料常规检测方法

实验一   粗蛋白的测定

一、实验原理：

       各种有机物质在还原性催化剂（如CuSO4、K2SO4、NaSO4或Se粉）的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使用蛋白质和其他有机态氮（在一定处理条件下也包括硝酸态氮）都转变成NH4并于H2SO4化合成（NH4）2SO4；而非含氮物质，则以CO2、H2O、SO2状态逸出，消化液在浓碱作用下进行蒸馏，释放出铵态氮，用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红、溴甲酚绿指示剂，用HCL标准溶液（0.1mol/l)滴定，求出氮含量，根据不同样品在乘以一定的系数（通常用6.25系数计算）即为粗蛋白的含量。

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其主要化学反应如下：

1、2NH4(CH2)2COOH+13H2SO4-------(NH4)2SO4+6凑+12SO4+16H2

2、（NH4)2SO4+2NaOH-----2NH3+3H2O+2NA2SO4

3、4H3BO3+NH3------NH4HB4O7+5H2O

4、NH4HB4O7+HCL+5H2O-----NH4CL+4H3BO3

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       本方法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。在测定结果中除蛋白质外，还有氨基酸、酰胺、铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等，故以粗蛋白标示之。

二、实验设备

         1、实验室用样品粉碎机或研体

         2、分析筛：孔径 0.45mm(40目）

         3、分析天平：感量 0.0001g

         4、消化炉

         5、滴定管：酸式滴定管，25或50ml

         6、消化管

         7、凯氏定氮仪

         8、三角瓶：250ml

         9、容量瓶：2000ml、100ml

三、实验试剂：

         催化剂：硫酸铜：无水硫酸钠=1:10（质量比）

         饱和氢氧化钠溶液：400g氢氧化钠溶于1L蒸馏水中

         甲基红：0.1g甲基红溶于100ml 95%乙醇中

         溴甲酚绿：0.2g溴甲酚绿溶于100ml 95%乙醇中

         硼酸溶液：2g硼酸溶于100ml蒸馏水中

         盐酸：0.1mol/L  8.3ml浓盐酸注入1L蒸馏水中（需进行标定，保留4位小数）

四、实验步骤

        1、称样：称取适量样品准确至小数后两位，于定量滤纸折成的纸包中，无损失的放入消化管中，加入2片催化剂，与试样混合均匀，再加98%浓硫酸，在消化炉上消化2h

         注：粪样、饲料样称取0.5mg,肉样称取0.2mg

                 粪样、饲料样加浓硫酸10ml,肉样加浓硫酸12.8ml

        2、氮的蒸馏：凯氏定氮仪选择程序一进行蒸馏，在锥形瓶中加入20ml硼酸，一滴甲基红，一滴溴甲酚绿用于收集蒸馏液

        注：蒸馏前选择程序二进行清洗

         3、滴定：蒸馏液立即用0.1mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点

         4、空白测定：不上样按上述测定步骤进行空白测定，消耗0.1mol盐酸标准溶液的体积应不超过0.2ml

          5、计算：每毫升的1mol/L盐酸标准溶液相当于0.0140g的 N

因此，

                        N% * 6.25=粗蛋白质（%）=[（V2 - V0）* c * 0.014 * 6.25 / m] * 100

式中：V2------试样滴定时所消耗盐酸标准滴定溶液的体积（ml）

           V0------空白滴定时所消耗盐酸标准滴定溶液的体积（ml）

           C------盐酸标准溶液的浓度（mol/L)

           m------试样的质量（g）

           0.0140-------每ml HCL 标准溶液相当于N克数

           6.25----氮换算成蛋白质的平均系数

       注：每个样取两个平行样进行测定，以其算数平均值为结果，当粗蛋白含量在25%以上，允许相对偏差为1%，当粗蛋白质含量在10%-25%时，允许相对偏差为2%，但粗蛋白含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。