噬菌体展示ELISA鉴定的抗体选择

无论用什么方法制备抗体，也不论制备何种抗体。制备的抗体的功能验证是十分重要的，而功能验证的前提是要得到高纯度的蛋白。通常我们使用的验证功能的方法是间接法elisa检测。间接elisa的原理这里不再赘述，但我们需要确定所用酶标抗体，这通常是表达的蛋白上所带有的标签蛋白的抗体。在此我们以噬菌体表面展示为例，说明抗体制备的ELISA鉴定抗体选择。

首先对表面展示相关载体做一个介绍：

pADL-10 Low-Display Phagemid Vector Series:

 

The phagemid pADL-20 Vector Series:

pADL-100 Maximum Display Phagemid Vector Series:

fADL Multivalent Phage Vector Series:

 

pHAL30:

phen:

pCANTAB:

 

这里只展示了一些载体的图谱，但通过这些载体的组成，我们可以了解到：用噬菌体展示技术制备抗体时，选择的噬菌体或嗜菌粒表面展示载体通常都带有标签蛋白——

His标签：该融合标签是由六个组氨酸残基组成的，可于目的蛋白的C端或N端插入，是蛋白纯化最常用的标签，可以利用镍柱将与His标签融合表达的目的蛋白进行纯化，增加蛋白的纯度。

Hemagglutinin (HA)标签：该标签含有9个氨基酸，序列为YPYDVPDYA，其源于流感病毒红细胞凝集素表面的抗原决定簇，对目的蛋白的空间结构影响小, 易融合表达到目的蛋白的N端或C端。易于用Anti－HA抗体进行ELISA等检测。

Myc标签：该标签含有10个氨基酸，标签序列为EQKLlSEEDL，可融合表达至目的蛋白的N端或C端。这10个氨基酸表达在不同的蛋白质框架中仍可作为抗原表位识别其相应抗体，因此Myc tag已成功应用在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 用于检测目的重组蛋白的表达。

甚至有时候会带上两个标签，His+HA，His+Myc，进行两种亲和层析的纯化，以得到高纯度、高特异性甚至高溶解性的目的蛋白。

除了标签抗体，噬菌体表面展示有时候还会用到M13抗体，接下来我们介绍一些M13重组抗体的商品情况：抗M13 的M13 Major Coat Protein（RL-ph1, IgG2b kappa light chain单克隆克隆抗体），M13酶标抗体（Anti-M13(HRP)Antibody），M13 g8p 抗体和HRP 酶标 M13 抗体（arigo）。酶标抗体可以直接用于ELISA检测，减少了二抗的使用，可以节约时间和成本。如果利用间接ELISA方法使用酶标二抗进行检测，在构建载体的过程中也不需要加入标签，可以直接进行噬菌体的ELISA检测，也不必担心标签的引入对抗体表达的影响。

文章来源：

1、https://wenku.baidu.com/view/8d9340c9ae51f01dc281e53a580216fc710a5354.html?fr=income4-doc-search&_wkts_=1706150647984&wkQuery=%E5%99%AC%E8%8F%8C%E4%BD%93%E5%B1%95%E7%A4%BAELISA%E9%89%B4%E5%AE%9A%E7%9A%84%E6%8A%97%E4%BD%93%E9%80%89%E6%8B%A9

2、https://www.tekbiotech.com/