什么是Fab抗体?Fab抗体片段表达服务详解【泰克生物】

Fab抗体是指由抗体的可变区（VH和VL）组成的抗体片段，是单克隆抗体的一个重要部分。Fab片段不仅保留了抗体与抗原结合的能力，还因其小巧的分子结构和较低的免疫原性，成为了许多生物医药领域的重要工具。随着技术的不断进步，Fab抗体的表达和制备技术得到了广泛应用。

1. Fab抗体的基本概念

Fab（Fragment antigen-binding）抗体片段是抗体的一个重要部分，通常由抗体的轻链和重链可变区域（VL和VH）组成。与完整的IgG抗体相比，Fab抗体片段缺少Fc区域，因此不具备免疫效应功能，如抗体依赖的细胞介导的细胞毒性（ADCC）和经典的补体激活功能。然而，Fab抗体片段依然能够保持特异性地与抗原结合，因此在靶向治疗、疫苗开发和免疫检测等领域具有重要的应用价值。

由于Fab抗体片段具有较小的分子量（大约50kDa），相比全长抗体，它们可以更容易地穿越细胞膜并渗透到组织中，成为了研究和治疗中的一种有效工具。

2. Fab抗体表达技术

Fab抗体的表达技术主要依赖于基因重组技术，通过在适当的表达系统中表达编码Fab片段的基因，获得高效的抗体片段生产。

目前，常用的Fab抗体表达系统包括大肠杆菌表达系统、酵母表达系统和哺乳动物细胞表达系统。其中，大肠杆菌系统以其成本低廉、表达速度快的优势，广泛应用于小规模Fab抗体的生产，但缺乏复杂的糖基化修饰。而酵母和哺乳动物细胞系统则更适合生产需要特定糖基化修饰的Fab抗体。

2.1 大肠杆菌表达系统

大肠杆菌系统由于其生长速度快、培养成本低，广泛用于Fab抗体的初步表达。通过将Fab抗体基因插入到大肠杆菌的表达载体中，并通过诱导条件促进表达，可以获得一定量的Fab抗体片段。然而，由于缺乏糖基化修饰，这种系统表达的Fab抗体片段主要用于体外实验或作为诊断试剂。

2.2 酵母表达系统

酵母系统具有较大规模生产的潜力，并能进行基本的糖基化修饰，适用于中等规模的Fab抗体生产。通过优化酵母的培养条件和诱导剂的使用，可以提高Fab抗体的表达量。酵母系统在高效表达和生产Fab抗体方面具有一定优势，但其糖基化模式与哺乳动物细胞系统相比，可能会有所不同。

2.3 哺乳动物细胞表达系统

对于需要高度复杂糖基化修饰的Fab抗体片段，哺乳动物细胞表达系统尤为重要。CHO细胞是目前最常用的哺乳动物细胞表达系统之一，能够完成包括糖基化、二硫键形成等复杂后期修饰，适合用于生产高质量的Fab抗体。哺乳动物细胞表达系统的缺点是成本较高、表达周期长，因此多用于临床研究和商业化生产。

3. Fab抗体片段制备过程

Fab抗体片段的制备通常包括几个步骤：基因克隆、表达、纯化和最终验证。以下是Fab抗体片段制备的详细流程：

3.1 基因克隆

首先，需要从全长抗体基因中提取可变区（VH和VL）的序列，并设计合适的引物进行PCR扩增。然后将扩增得到的基因片段克隆到适合的表达载体中，通常选择大肠杆菌或哺乳动物细胞表达系统中使用的载体。

3.2 表达系统的选择

选择合适的表达系统来生产Fab抗体片段。根据实验需求，可以选择大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞系统进行表达。大肠杆菌系统适用于快速生产和小规模生产，而CHO细胞等哺乳动物细胞系统则用于需要复杂后期修饰的Fab抗体片段。

3.3 Fab抗体纯化

表达出的Fab抗体片段需要经过纯化，以去除杂质和其他不需要的蛋白质。常用的纯化方法包括亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤等。在亲和层析过程中，Fab片段通常通过与抗体抗原结合的能力来进行纯化。

3.4 验证和应用

纯化后的Fab抗体片段需要通过各种方法进行验证，如Western blotting、ELISA、免疫沉淀等。确认Fab抗体片段的结构完整性和生物活性后，可用于进一步的应用研究。

4. Fab抗体生产的应用

Fab抗体片段广泛应用于生物医药领域，尤其是在靶向治疗、抗体药物开发、免疫诊断和疾病监测等方面。

- 靶向治疗：Fab抗体片段可用于靶向癌细胞或病原体的特定抗原，具有较小的分子量，能够更好地渗透组织并进行高效的靶向治疗。

- 免疫诊断：Fab抗体片段由于其小巧的结构和较低的免疫原性，适用于开发高效、特异的免疫诊断试剂。

- 抗体药物开发：通过Fab抗体片段的融合，开发抗体药物可以提高治疗效果，减少副作用。

Fab抗体片段作为一种具有高度特异性和靶向能力的抗体形式，已经在生物医学研究和临床应用中得到了广泛应用。随着表达系统和制备技术的不断发展，Fab抗体片段的生产效率和质量不断提升，未来将在更多领域发挥重要作用。

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参考文献：

1. R. A. Kieber-Emmons, et al., "Fab fragments in therapeutic applications," Journal of Immunology, 2014.

2. M. L. Rees, et al., "Expression and production of Fab antibodies for diagnostic applications," Biotechnology Advances, 2015.

3. H. L. Zhang, et al., "The role of Fab fragments in immunotherapy," Clinical Immunology, 2016.