医学实验-AI辅助解读细胞传代操作

细胞传代实验的基础操作流程是互通的，但是针对不同细胞，不同课题，在实际操作时培养基和消化液的类型可能会略有所不同。那么在掌握实验操作技能的同时，你是否明白各个步骤的具体的作用呢？接下来，我将以丁香园的这个protocol为例，结合AI问答与个人理解，展开叙述。

1.为什么选取生长密度为80%的细胞？

细胞生长密度约为70%-80%时，细胞处于生长对数期，细胞以最活跃的速率进行分裂和增殖。在这一阶段，细胞的代谢活动最为旺盛，细胞数量能够迅速增加。并且这个密度范围的细胞形态和功能都相对较好，传代后细胞能有较好的适应性和增殖能力。

此外，更是出于实验实际经验得出的结论。想必大家都听说过一句话“细胞传代，不要太密也不要太稀”，这是因为空间和营养物质有限的情况下，密度过高，细胞间竞争会增大，影响增殖速率和功能等，部分细胞可能衰老或者状态不佳，那这样就会影响后续实验了。而且细胞的增殖速率很高，有些2-3天就能传完一代，相对简便易得，性价比高，相对没那么稀缺，所以传代的时候细胞不用很密集。

2.各步骤的具体作用是什么？

步骤可概括为弃培养基-加PBS溶液，弃PBS-加胰蛋白酶，弃去-CO2培养箱消化2-3min-显微镜观察后，加10% FBS 的培养基终止消化-吹打转移后离心-弃上清，加培养基，按比例传代

1. 吸去旧培养基并使用 PBS 溶液洗涤---清洗细胞

旧培养基中有残留物，包括代谢废物、死细胞和其他杂质，用PBS可帮助清洗细胞表面，去除培养基中的血清及其成分，因血清中通常含有对细胞增殖和生长有影响的生长因子。

2. 加入胰蛋白酶消化液---消化，分离细胞

胰蛋白酶能够切割细胞膜上的黏附蛋白，促使细胞从培养皿表面脱落分离。消化时间的把控非常重要，过短可能导致细胞未能完全脱离，过长则可能造成细胞的损伤。

3. 加入含 FBS 的培养基---终止消化

胰蛋白酶消化后需要终止，FBS 中含有的蛋白质和其他成分能够有效阻断胰蛋白酶的作用，避免细胞过度消化造成伤害。同时，这一步骤培养基的成分还提供必要的养分以促进细胞恢复活力。

4. 吸取细胞悬液，离心分离---分离细胞与其它物质

通过离心，细胞会因重力作用沉淀在管底，胰蛋白酶和多余的培养基等不需要的成分则在上清液，可以将其区分开，为后续的重悬做好准备。

5. 重悬细胞并进行适当的传代---重悬及传代

将细胞重悬在完全培养基中，以确保细胞在新培养环境中的生长。同时，按适当比例传代（如 1 皿细胞传 2 皿或 3 皿）。

可以通俗的将细胞传代的实验步骤理解成：你需要将上一代的细胞洗一洗，再加试剂将它分离开让它脱落，再加入新试剂去除上一个试剂效应，再将细胞与加的试剂分离开，然后将细胞接种到新的培养基上 ，有点类似于把植物嫁接到新环境。

最后，今天的分享就到此结束啦，希望大家可以善用AI工具，顺利科研，成果多多。

实验protocol参考丁香园：细胞传代培养实验-细胞传代培养（悬浮、贴壁）-丁香实验