前言
蛋白标签(Protein Tag)是一种与目的蛋白融合表达的多肽或蛋白,用于辅助目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。常见的标签蛋白根据用途分为多肽标签(如Flag tag、His tag)、亲和标签(如MBP、GST)和荧光标签(如mCherry)。
标签抗体(Tag Antibody)是一类特异性抗体,能够识别并结合到融合蛋白上的特定标签序列,用于检测和纯化目标蛋白,广泛应用于蛋白质表达、定位、相互作用和功能研究等领域。标签抗体与琼脂糖珠结合后,可以有效地从细胞裂解液中拉下与之结合的蛋白,实现对目标蛋白的分离和纯化,常应用于免疫沉淀和蛋白纯化。
mCherry
mCherry是生物研究中最常用的红色荧光蛋白(RFP),是一种单体形式的红色荧光蛋白,从圆盘海葵的红色荧光蛋白DsRed经由基因改造而来。mCherry的最大吸收和发射波长分别位于587nm和610nm左右,融合表达在目的蛋白时,mCherry荧光蛋白的活性和目的蛋白功能独立无显著相互影响。
mCherry优势
荧光亮度高:在红色光谱范围内具有较好的荧光特性,在成像时可以提供强烈的信号。
优异的光稳定性:对光致漂白的耐受性较强,即使在长时间的光照下也能保持稳定的荧光信号。
背景荧光低:在标记实验中可提供清晰而显著的荧光标记,有利于细胞观察计数。
快速成熟时间快:t0.5仅为15分钟,利于启动子活性报告系统中快速反应。
单体形式:不依赖于其他亚基形成活性形式,融合时不会破坏其功能结构。
适合活细胞成像:mCherry适合于活细胞成像,可以用来研究基因表达的动态变化。
广泛的适应性:已经广泛用于原核细胞和真核细胞。适用于多种生物学实验,包括启动子活性研究、荧光共振能量转移(FRET)和其他定量实验。
操作简便:mCherry的表达系统无需添加诱导剂,且适用于诱导剂添加困难场景,如重组菌在实验动物胃肠道环境中表达蛋白。
与其他荧光蛋白或报告基因结合使用:可进行多色标记和共定位研究,可以与CRISPR激活系统结合,用于监测内源基因的表达。
mCherry的诸多优势高亮度、快速成熟、良好的光谱特性、单体形式、低背景干扰、适用于活细胞成像、与其他系统的兼容性、广泛的适用性、有助于功能研究以及简化操作过程。这些特性使得mCherry成为研究基因表达和细胞生物学功能的强大工具。