荧光标记肿瘤细胞解决方案

活体成像技术在肿瘤学、药物研究、基因治疗、干细胞与免疫学、基因表达模式研究、蛋白质相互作用、细胞凋亡、疾病机理等领域展现出广泛应用。它提供了对体内生物过程的非侵入式、高灵敏度的实时监测,有助于理解疾病机制、药物效果评估和基因功能探索。

摘要生成于 C知道 ,由 DeepSeek-R1 满血版支持, 前往体验 >

活体成像是科学研究和药物研发的常用方法。进行此实验的前提是必须要有能稳定表达发光基因的细胞。常用的发光基因包括萤火虫萤光素酶(firefly luciferase,Fluc)、绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(tdTomato)。本部分汇集了几种常用的稳定转染了Fluc的癌细胞系,并从Fluc、GFP、tdTomato转基因动物体内分离得到了发光的免疫细胞。这些细胞是进行基础研究和药物研发的常用工具。

》》点我可查看更多详情!

 

活体生物发光成像技术是一项在某些领域有不可替代优势的技术,比如肿瘤转移研 究、药物开发、基因治疗、干细胞示踪等方面

1.肿瘤学 
活体生物发光成像技术能够让研究人员直接快速的测量各种癌症模型中肿瘤的生长、转移以及对药物的反应。其特点是极高的灵敏度使微小的肿瘤病灶(少到几百个细胞)也可以被检测到,比传统方法的灵敏度大大提高了;非常适合于肿瘤体内生长的定量分析;避免由于宰杀老鼠而造成的组间差异;节省动物成本。由于以上特点,使基于转移模型、原位模型、自发肿瘤模型等方面的肿瘤学研究得到发展。建立肿瘤转移模型,

可以观察肿瘤转移情况,进一步探讨肿瘤转移的机制;可进行原位接种,观察原位以及
原位转移模型,使肿瘤学研究更接近肿瘤临床发病的微观环境;通过建立自发肿瘤模型, 可以观察肿瘤发生机理。(图 11-1)。     

 
 
 
图11-1 肿瘤的长期检测,左图分别是7天,14天,30天成像。来自中国军事医学科学院

 

2.药物研究 
在药效学评价方面,荧光素酶癌症模型可用于癌症体内用药在整体动物水平上进行长期疗效跟踪观察。利用无创伤活体成像对癌细胞生长的检测,可对癌症治疗之前和过程中的癌细胞的变化进行实时观测和评估。这种方式提供一个很好的对癌细胞的反应和复发评估的预诊断途径。用活体成像的方法比传统技术有更高的灵敏度,当用传统的方法还不能检测到瘤块时,用该技术已经可以检测到很强的信号。由于该技术只是检测活细胞,不能检测已经凋亡的细胞。而用传统的方法,不能区别正常细胞与凋亡的细胞, 所以该技术可以比传统技术更早更灵敏的发现药物的疗效。 

利用活体成像技术高灵敏度、观察方便的特点,在抗肿瘤药物临床前研究中,通过给予肿瘤接种的小鼠不同剂量,不同给药时间、不同给药途径,观察抗肿瘤药物的最佳 给药途径、给药剂量及给药时间,从而制定合适的剂型与服药时间。 在药物代谢方面,标记与药物代谢有关的基因,比如 CYP3A4 等,研究不同的药 物对该基因表达的影响,从而可以间接知道相关药物在体内代谢的情况。 


在药剂学研究方面,可以通过把荧光素酶报告基因的质粒直接装载在药物载体中, 观察药物载体的靶向脏器与体内分布规律(图 11-2)。在药理学方面,还可以通过转基
因小鼠的应用,观察药物作用的通路,用荧光素酶基因标记某一个兴趣基因,观察药物 作用的通路。

3.基因治疗 
基因治疗是将正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入靶细胞以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用,从而达到治疗疾病目的。目前,基因治疗主要是以病毒做载体,可应用荧光素酶基因作为报告基因加入载体,观察目的基因是否到达动物体内的特异组织和是否持续高效表达,这种非侵入方式具有低毒性及免疫反应轻微等优点且可以直接实时观察,了解病毒或载体侵染的部位和时域信息;荧光素酶基因也可以插入脂质 体包裹的 DNA分子中,用来观察脂质体为载体的 DNA 运输和基因治疗情况;也可以 表达荧光素酶基因的质粒裸 DNA为模型 DNA,直接注入动物体内,利用生物发光成像可以分析不同载体、不同注射位点、不同注射量对荧光素酶基因表达的影响,同时也可 以时空量化分析基因表达的分布、水平和持续时间。这种可视的方法直观地评价 DNA 的转染效率和表达效率,在基因治疗研究中具有重要的指导作用。

4.干细胞及免疫学 
用荧光素酶标记干细胞有以下几种方法:一种是标记组成性表达的基因,做成转基因动物,干细胞就被标记了,若干细胞移植到另外动物体内,可以用活体生物发光成像技术示踪干细胞在体内的增殖、分化及迁徙的过程;另外一种方法是用慢病毒直接标记干细胞后,移植到体内观测其增殖、分化及迁徙过程,研究其修复、治疗损伤或缺陷部 分的效果,进一步探讨其机制。 

可以通过标记免疫细胞,观察免疫细胞对肿瘤细胞等的识别和杀死功能,评价免疫细胞的免疫特异性、增殖、迁移及功能等;通过标记异体细胞,观察异体细胞对器官移 植影响;也可进行一些关于免疫因子的研究等。

5.基因表达模式与基因功能研究 
研究基因表达可以从影响基因表达的各个不同的层面进行相关的研究,如利用融合 蛋白( p27-luc 融合蛋白研究其在 Cdk 细胞分裂周期的表达),兴趣基因启动子控制的荧 光素酶(Catenin 在肿瘤转移的信号传导机制),siRNA 方式和转基因动物等方法。 
为研究目的基因是在何时、何种刺激下表达,将荧光素酶基因插入目的基因启动子的下游,并稳定整合于实验动物染色体中,形成转基因动物模型。通过这种方法实现荧光素酶和目的基因的平行表达,从而可以直接观察目的基因的表达模式,包括数量、时间、部位及影响其表达和功能的因素等;也可用于研究动物发育过程中特定基因的时空
表达情况,观察药物诱导特定基因表达;以及其它生物学事件引起的相应基因表达或关 闭。

6.蛋白质相互作用 
可利用动物体内生物发光成像技术研究活体动物体内蛋白与蛋白的相互作用。其原 理是将分开时都不单独发光的荧光酶的 C 端和 N 端分别连接在两个不同的蛋白质上, 若是这两个蛋白质之间有相互作用,荧光酶的 C 端和 N 端就会被连接到一起,激活荧光素酶的转录表达,在有底物存在时出现生物发光。在活体条件下研究药物对蛋白质相
互作用的影响,可以观察到在体外实验中无法模拟的活体环境对蛋白质相互作用的影 响。

7.细胞凋亡 
利用活体动物生物发光成像技术,直接观察活体动物体内的细胞凋亡。具体原理是 用分子生物学方法在荧光酶的两端连接上抑制其发光的蛋白(如雌激素),但在其连接处 加上 caspase (细胞凋亡时特异表达的一种酶)的酶切点。细胞发生凋亡时,表达 caspase, 切开抑制荧光酶发光的蛋白,使荧光素酶开始发光。

8. 疾病机理 
可以标记与某种疾病密切相关的基因,做成转基因小鼠,通过特定的药物作用或其 他条件下该基因表达的变化,来推测该疾病的发病机理和药物对疾病治疗的效果等。

9.其他 

如 RNAi、蛋白质核运输等。在荧光素酶基因的一端接要研究的蛋白质的基因,另一端接肯定在细胞核内表达的蛋白的基因,当核外的蛋白运输到核内时,就会导致荧光 素酶 N 端、C 端靠近,恢复发光。 

 

 

在探索智慧旅游的新纪元中,一个集科技、创新与服务于一体的整体解决方案正悄然改变着我们的旅行方式。智慧旅游,作为智慧城市的重要分支,旨在通过新一代信息技术,如云计算、大数据、物联网等,为游客、旅游企业及政府部门提供无缝对接、高效互动的旅游体验与管理模式。这一方案不仅重新定义了旅游行业的服务标准,更开启了旅游业数字化转型的新篇章。 智慧旅游的核心在于“以人为本”,它不仅仅关注技术的革新,更注重游客体验的提升。从游前的行程规划、信息查询,到游中的智能导航、个性化导览,再到游后的心情分享、服务评价,智慧旅游通过构建“一云多屏”的服务平台,让游客在旅游的全过程中都能享受到便捷、个性化的服务。例如,游客可以通过手机APP轻松定制专属行程,利用智能语音导览深入了解景点背后的故事,甚至通过三维GIS地图实现虚拟漫游,提前感受目的地的魅力。这些创新服务不仅增强了游客的参与感和满意度,也让旅游变得更加智能化、趣味化。 此外,智慧旅游还为旅游企业和政府部门带来了前所未有的管理变革。通过大数据分析,旅游企业能够精准把握市场动态,实现旅游产品的精准营销和个性化推荐,从而提升市场竞争力。而政府部门则能利用智慧旅游平台实现对旅游资源的科学规划和精细管理,提高监管效率和质量。例如,通过实时监控和数据分析,政府可以迅速应对旅游高峰期的客流压力,有效预防景区超载,保障游客安全。同时,智慧旅游还促进了跨行业、跨部门的数据共享与协同合作,为旅游业的可持续发展奠定了坚实基础。总之,智慧旅游以其独特的魅力和无限潜力,正引领着旅游业迈向一个更加智慧、便捷、高效的新时代。
内容概要:本文详细介绍了大模型的发展现状与未来趋势,尤其聚焦于DeepSeek这一创新应用。文章首先回顾了人工智能的定义、分类及其发展历程,指出从摩尔定律到知识密度提升的转变,强调了大模型知识密度的重要性。随后,文章深入探讨了DeepSeek的发展路径及其核心价值,包括其推理模型、思维链技术的应用及局限性。此外,文章展示了DeepSeek在多个行业的应用场景,如智能客服、医疗、金融等,并分析了DeepSeek如何赋能个人发展,具体体现在公文写作、文档处理、知识搜索、论文写作等方面。最后,文章展望了大模型的发展趋势,如通用大模型与垂域大模型的协同发展,以及本地部署小模型成为主流应用渠道的趋势。 适合人群:对人工智能和大模型技术感兴趣的从业者、研究人员及希望利用DeepSeek提升工作效率的个人用户。 使用场景及目标:①了解大模型技术的最新进展和发展趋势;②掌握DeepSeek在不同领域的具体应用场景和操作方法;③学习如何通过DeepSeek提升个人在公文写作、文档处理、知识搜索、论文写作等方面的工作效率;④探索大模型在特定行业的应用潜力,如医疗、金融等领域。 其他说明:本文不仅提供了理论知识,还结合实际案例,详细介绍了DeepSeek在各个场景下的应用方式,帮助读者更好地理解和应用大模型技术。同时,文章也指出了当前大模型技术面临的挑战,如模型的局限性和数据安全问题,鼓励读者关注技术的持续改进和发展。
评论 1
添加红包

请填写红包祝福语或标题

红包个数最小为10个

红包金额最低5元

当前余额3.43前往充值 >
需支付:10.00
成就一亿技术人!
领取后你会自动成为博主和红包主的粉丝 规则
hope_wisdom
发出的红包
实付
使用余额支付
点击重新获取
扫码支付
钱包余额 0

抵扣说明:

1.余额是钱包充值的虚拟货币,按照1:1的比例进行支付金额的抵扣。
2.余额无法直接购买下载,可以购买VIP、付费专栏及课程。

余额充值