【整理】各类细胞转染步骤合集

显微镜下LAMP1-GFP转染的SHSY5Y 细胞

转染的类型

根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短,可以分为瞬转和稳转。根据转染方式可以分为化学,生物,物理方法。

瞬转:因为导入的核酸没有整合到宿主细胞基因组,因此它只会短暂地存在于宿主细胞中,不会随着细胞的分裂而进入到子代细胞中。然而,导入的遗传物质的高拷贝数导致其在细胞内的蛋白质表达水平较高。根据所使用的载体的不同,瞬转通常可以1至7天内进行基因检测,但是瞬时转染的细胞通常在转染后24-96小时收获。当使用超螺旋质粒DNA时,瞬时转染的效果最好,推测是由于超螺旋质粒DNA能更有效地被细胞摄取。

稳转:外源DNA整合到细胞基因组中或作为附加体质粒保留在细胞中。与瞬时转染不同,稳定转染允许外源DNA在转染的细胞及其后代中的长期维持。然而,通常是将单拷贝或几个拷贝的外源DNA整合到稳定转染的细胞的基因组中,因此,其表达水平一般低于瞬时转染的表达水平。

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