BCA蛋白浓度测定(Bicinchoninic Acid Assay)是一种常用于测定蛋白质浓度的方法,通常用于生物化学实验室中。这种方法基于蛋白质与BCA试剂中的铜离子反应而形成的紫色螯合物的测量。
以下是进行BCA蛋白浓度测定的步骤:
1.样品制备:
准备待测蛋白样品。可使用PBS等缓冲液稀释蛋白样品。
对于未知浓度的样品,通常进行一系列稀释,以确保蛋白质含量在标准曲线范围内。
2.制备标准曲线:
准备一系列已知浓度的蛋白标准溶液(如0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1 mg/ml)。
在微孔板中加入一定体积的每个标准溶液,并加入BCA试剂。
3.添加BCA试剂:
将待测样品和标准溶液以及空白对照加入到微孔板中,每个样品加入适量的BCA试剂。
4.反应孵育:
在37摄氏度下孵育反应,通常约为30分钟至1小时,以促进蛋白质与BCA试剂的反应。
5.吸光度测量:
使用分光光度计在562 nm左右的波长下测量吸光度。
根据标准曲线上各个已知浓度点的吸光度值绘制标准曲线。
6.计算待测样品蛋白浓度:
根据待测样品的吸光度值在标准曲线上找到对应的蛋白质浓度。
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以上资料来自昊然小编MSQ.2023.12.8