点成分享丨ELISA实验的类型及原理

ELISA实验，即酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）实验，是免疫学中的经典实验之一，它是一种利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法，目前已被广泛应用于生物学、医学、植物学、病理学等多种研究领域。

ELISA实验基本原理：

ELISA实验是将已知的抗原或抗体结合在固相载体表面，然后利用酶标记（偶联）的抗体或抗原与之孵育，再通过显色物显色，其显色深浅与待测物质的含量直接相关，由此可进行定性或定量分析。

ELISA实验的常见类型：直接法、间接法、夹心法和竞争法

一、直接法（Direct ELISA）：

原理：将抗原或抗体固定于酶标板上，然后用酶标抗体或抗原直接检测。

主要用途：分析抗原的免疫反应。

优点	缺点
步骤少，实验周期短，检测速度快 不需二抗，交叉反应较低，实验不易出错	实验背景高，且检测对象有限 灵活性差，需要针对每种靶蛋白的特异性一抗 检测灵敏度不高，没有使用二抗，信号没有放大

二、间接法（Indirect ELISA）：

原理：将抗原或抗体固定于酶标板上，随后分两步进行检测，先加入检测抗体或抗原进行特异性结合，后加入酶标二抗检测并利用底物显色。

主要用途：测定样品中总抗体的浓度。

优点	缺点
使用酶标二抗，灵敏度高 标记抗体更少，更加经济，也更灵活	可能存在交叉反应，增加实验背景 增加了二抗孵育步骤，实验周期延长

三、夹心法（Sandwich ELISA）：

双抗体夹心法：将此方法常用于检测抗原。将抗体固定在固相载体上，加入待测抗原，与抗体特异性结合，再加入酶标抗体检测，并利用底物显色，即可测定总靶标蛋白的含量。

双抗原夹心法：反应模式与双抗体夹心法类似，用固相抗原和酶标特异性抗原，分别代替固相抗体和酶标特异性抗体，即可测定样品中的抗体。

主要用途：对复杂样品进行分析，适用于检测具有两个以上识别位点的大分子蛋白。

优点	缺点
灵敏度和特异性高 抗原无需事先纯化	对配对抗体要求高

四、竞争法（Competitive ELISA）：

原理：样本中的抗原及预包被的酶标抗原，竞争性地与固相抗体相结合。样本中的抗原含量越多，结合在固相上的酶标抗原就越少，最终显色也越浅。显色结果与待检抗原（或抗体）的量成反比。

主要用途：常用于只有一种抗体可用于目标抗原的情况，也适用于检测不能被两种不同抗体结合的小抗原。

优点	缺点
可检测不纯的样品，数据再现性高 可基于其他ELISA方法，灵活性高	整体敏感性和专一性较差 操作繁琐复杂

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