一、FAOBlue及其香豆素衍生物的吸收光谱和荧光光谱
在PBS缓冲液(pH 7.4)中,FAO代谢后释放的FAOBlue和香豆素衍生物的吸收光谱(左)、荧光光谱(右)。
FAOBlue经过FAO转化为香豆素衍生物后,吸收峰从FAOBlue发生偏移至405 nm。因此,在405 nm的激发条件下,FAOBlue不会发出荧光,只有在通过FAO释放香豆素衍生物时才会发出蓝色荧光。
注:FAOBlue在300-380 nm(最大350 nm)激发时显示蓝色荧光(灰色线,370-450 nm),所以在选择滤光片时请格外注意,避免同时激发未反应的FAOBlue以及FAO反应后的香豆素衍生物。
二、各种癌细胞中FAO活性可视化
在4种癌细胞中加入FAOBlue,培养一定时间后进行荧光观察。所有细胞都出现蓝色荧光,而经过FAO抑制剂etomoxir处理后蓝色荧光显著减少。这些数据表明,蓝色荧光是由活细胞中FAO活性引起的。(注:实验条件根据细胞类型不同而不同)