如何通过实验室离心机深入了解细胞

通过实验室离心机采用差速离心法来分离细胞内的各种成分，从而到达了解细胞核和线粒体并进行鉴定的目的。

离心是一种利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或浮力密度的差异进行分离、浓缩和提纯的方法。实验室离心机的离心技术已在细胞分离实验过程中广泛应用。进行细胞培养时，常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用实验室离心机。一般可常规配置4000rpm的国产台式离心机，例如细胞沉降，使用低速离心机即可，离心力过大有时可能引起细胞的损伤。

分离纯化的方法有2种：主要包括差速离心、密度梯度离心等。

差速离心：

差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞。开始离心的速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在上清液中。收集沉淀，改用较高的离心速度离心悬浮液，将较小的颗粒沉降，以此类推，达到分离不同大小颗粒的目的。

密度梯度离心：

·当颗粒之间存在沉降系数差时，在一定的离心力作用下，颗粒以一定速度沉降在不同的密度梯度区域中形成区带的方法。

·用两种浓度的蔗糖溶液制成的梯度，离心机离心后，线粒体和比它沉降系数小的细胞成分聚集在梯度交界处，而沉降系数较大的细胞组分沉到离心管的底部。

动物肝细胞匀浆制备实验:

（1）取出肝脏（2g左右），先用清水冲洗干净后，放在置于冰块上的培养皿中用剪刀剪成小块，去除结缔组织，用生理盐水反复洗涤，尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。

（2）加入10mL预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液

（3）将悬浮的肝组织液倒入组织捣碎机中进行捣碎，直至没有可见的组织块为止。

（4）将肝组织捣碎液分装在50ml离心管中，实验室离心机1500rpm 4°下离心2min (去除大组织块)。

用差速离心法分离细胞匀浆中的各种细胞组分：

常用介质：

常用介质(高溶解性的惰性物质):氯化艳、蔗糖、多聚蔗糖。

在整个实验过程中除了按规定操作外，要格外注意离心机的使用安全，并尽可能的充分分割肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。