西瓜高效遗传转化方法

西瓜原产于非洲，属于葫芦科西瓜属，是一种水分含量高、维生素种类丰富、含钾镁等矿物质、含有番茄红素和β-胡萝卜素等抗氧化剂的营养价值丰富的水果。

2021年11月6日，北京大学现代农业研究院张华伟实验室发表了题为“Efficient transformation and genome editing of watermelon assisted by genes that encode developmental regulators”的研究论文，该研究借助编码发育调节因子(DR)的基因，将西瓜的转化效率提高至约25%，与传统方法相比之下提高了40倍。

首先选择选择卡那霉素（nptII）作为筛选标记基因，构建了含新霉素磷酸转移酶II（nptII）基因与红色荧光蛋白DsRed2的报告载体pW501。用农杆菌菌株EHA105、GV3101、LBA4404介导转化西瓜子叶，结果显示，EHA105菌株的转化效率最高。

图1.带有DR载体示意图

为了探究DRs对西瓜遗传转化的影响，将多个DR基因构建至pW501载体上，转化西瓜品种WWl50。结果显示，在携带DR基因的载体中，过表达拟南芥GRF5（AtGRF5）的pW502的转化效率最高。

图2.西瓜品种WW150的转化效率

研究人员进一步将pW502载体转入农杆菌菌株GV3101、EHA105和LBA4404。结果显示，GV3101是最适宜递送pW502（AtGRF5）用于西瓜遗传转化的菌株。

最后，研究人员将经过密码子优化的AtGRF5基因整合至CRISPR/Cas9载体pHSE401中，成功构建了pZHW512载体。并采用了两个针对西瓜八氢番茄红素脱氢酶基因的特异性间隔序列（T1和T2）。PDS基因的突变，该突变可验证编辑效率。将载体转入西瓜子叶片段后，结果显示，AtGRF5基因能够促进CRISPR/Cas9系统产生预期的基因编辑效果。

图3.CRISPR/Cas9介导的基因组编辑

综上所诉，特定基因DR，尤其是AtGRF5的表达，可显著提升西瓜的遗传转化效率，且未对植物的生长产生影响。通过对3种农杆菌菌株进行比较，发现GV3101菌株在西瓜的遗传转化中转化效率最高。

参考文献：

[1]Pan, W., Cheng, Z., Han, Z., Yang, H., Zhang, W., Zhang H. (2022).Efficient genetic transformation and CRISPR/Cas9-mediated genome editing of watermelon assisted by genes encoding developmental regulators.Zhejiang Univ.23(4):339-344.