Rhod-2，AM，Cell Permeant 钙离子荧光探针，实验操作和染色步骤

一、试剂描述

Rhod-2 AM（Rhod-2的乙酰甲酯衍生物）是一种用于细胞内钙离子（Ca²⁺）检测的荧光探针。

其基本特性如下：

细胞膜通透性：Rhod-2 AM具有细胞膜通透性，能够轻易进入细胞 。

内酯酶水解：进入细胞后，Rhod-2 AM在细胞质内的内酯酶作用下水解生成不透膜的Rhod-2，从而滞留在细胞内，比如：线粒体中 。

线粒体定位：Rhod-2 AM通过线粒体膜电位依赖的方式富集在线粒体基质中，避免与其他细胞器（如内质网）的交叉标记 。

较高亲和力：Rhod-2与Ca²⁺结合后，荧光强度增强（约100倍），激发波长为549 nm，发射波长为581 nm 。

动态响应范围：解离常数（Kd）约为570 nm，适用于检测从生理浓度（100 nM）到病理浓度（>1 μM）的Ca²⁺浓度变化 。

二、物理参数

【CAS NO】：129787-64-0

【分子式】：C52H59N4O19Br

【分子量】：1123.96

【Ex/Em】：549/578 nm

【状态】：红色固体

【溶解性】：溶于DMSO（2~5mM）

【纯度】：≥95%

【储存条件】：-20℃避光干燥

三、实验操作方法

染色条件调整：

细胞密度建议1×10⁵ cells/mL，避免过度拥挤。

工作液配制：5-10 μM（溶于无血清培养基或PBS），添加0.02% Pluronic F-127增强溶解性。

染色步骤：

孵育：37°C避光30分钟，后续清洗及20分钟平衡以减少背景信号。

线粒体定位验证：荧光显微镜下观察点状染色模式。

储存与稳定性

储存条件：粉末形式需-20℃避光干燥保存，溶解后分装冻存（≤-20℃），避免反复冻融。

溶解性：溶于无水DMSO（2-5 mM储备液），避免使用含水溶剂以防AM基团水解。

保质期：粉末可保存1年以上，溶液建议1个月内使用。

四、试剂结构

五、相关试剂

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Di-8-ANEPPS膜电位荧光探针

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Nigericin,Sodium Salt尼日利亚菌素（钠盐)

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MitoPerOx Mitochondrial Lipid Peroxidation Indicator线粒体脂质过氧化

本文章由西安强化生物科技xxn编写！

特别提示：该试剂仅供科研机构实验室使用，严禁用于临床诊疗及食品领域！