FM4-64神经末梢探针，储存液配制和染色的方法

一、试剂描述

FM4-64，是一种亲脂的苯乙烯染料，用作一种活细胞探针示踪酵母整体膜内在化和运输到液泡。

FM4-64是一种液泡动力学分析探针，检测有丝分裂中的分离结构形成、液泡分裂和融合事件，以及液泡蛋白质分拣蛋白突变体在不同阶段的液泡形态。

二、物理参数

【分子式】：C30H45Br2N3

【分子量】：607.51

【Ex/Em】：558/734nm

【状态】：紫色固体

【纯度】：≥95%

【储存条件】：-20℃避光干燥

三、储存液配制

实验前将冻干粉置于室温回温20min，加入无菌水或DMSO配制成10mM或其他浓度储存液，比如对于1mg FM 4-64加入164μl DMSO,溶解后即得到10mM储存液。

根据单次用量分装，≤-20℃冻存，避免反复冻融。

四、试剂结构

五、染色方法

（1）用提前冰浴的HBSS缓冲液来稀释储存液到所需的工作浓度。（比如8μM。）

（2）将盖玻片从培养基内取出，浸入含FM 4-64的染色工作液，冰上孵育1min。质膜能被染色。

（3）将盖玻片从染色工作液中取出，置于载玻片上封片，周围用石蜡密封，置于冰上，即成像。

【注意】

以上以爬片生长的贴壁活细胞的质膜染色为例，染色条件根据使用细胞特征进行调整。

由于FM 4-64被内吞，要调整温度和时间指导来减慢内吞，提高质膜的选择性标记和成像。内吞很可能在染色的10min内发生。

以上步骤使用不含钙镁的HBSS。钙镁的存在明显会加速染料内吞，导致质膜选择性染色很弱。

六、相关试剂

FM1-43(N-(3-Triethylammoniumpropyl)-4-(4-(dibutylamino)styry)pyridinium dibromide)

FM2-10(N-(3-Triethylammoniumpropyl)-4-(4-(diethylamino)styryl)pyridinium dibromide)

FM4-64(N-(3-Triethylammoniumpropyl-4-(6-(4-(Diethylamino)Phenyl)Hexatrienyl)Pyridinium Dibromide)

RH237(N-(4-Sulfobutyl)-4-(6-(4-(dibutylamino)pheny)hexatrienyl)pyridinium,linner salt)

RH421(N-(4-Sulfobutyl-4-(4-(4-(dipentylamino)phenylbutadieny)pyridinium, inner salt)

RH414(N-(3-Triethylammoniumpropy)-4-(4-(4-(diethylamino)phenyl)butadienyl)pyridinium dibromide)

MitoPerOx Mitochondrial Lipid Peroxidation Indicator线粒体脂质过氧化

MitoSOX Green Mitochondrial Superoxide Indicator绿色线粒体超氧化物荧光探针

本文章（以上资料）由西安强化生物科技xxn编写！

特别提示：该试剂仅供科研机构实验室使用，严禁用于临床诊疗及食品领域！