微流控文献分享2

1.A microfluidic impedance biosensor based on immunomagneticseparation and urease catalysis for continuous-flow detection of E. coliO157:H

早期筛查食源性病原体是控制食源性疾病暴发的关键。 本研究开发了一种微流控阻抗生物传感器，结合用于细菌分离的免疫磁性纳米颗粒（MNP）、用于生物信号放大的脲酶和用于阻抗测量的微流控芯片，用于快速、灵敏、连续流检测大肠杆菌O157： H7。 将链霉亲和素修饰的MNP与生物素化多克隆抗体（PAb）缀合形成免疫MNP后，MNP首先将目标细菌从背景中分离出来，形成MNP-细菌复合物。 然后，将脲酶修饰的金纳米粒子（GNP）和针对大肠杆菌O157:H7的适配体与MNP-细菌缀合，形成MNP-细菌-GNP-脲酶复合物。 最后，配合物催化尿素水解成碳酸铵，导致阻抗降低。 通过该生物传感器在线测量阻抗，并使用阻抗标准化进行分析以确定大肠杆菌 O157:H7 的浓度。 催化剂的阻抗相对变化率与细菌浓度之间具有良好的线性关系，检测限低至12CFU/mL。

2.An automatic centrifugal system for rapid detection of bacteria based on immunomagnetic separation and recombinase aided amplification

本研究报道了一种自动离心系统，用于快速定量食源性致病菌，该系统基于用于目标细菌富集的免疫磁性分离（IMS）和用于核酸检测的重组酶辅助扩增（RAA）。 首先，利用免疫磁性纳米粒子（MNPs）捕获目标细菌，形成磁性细菌，通过磁分离进行纯化和富集。 然后，用核酸提取缓冲液提取磁性细菌的基因组DNA并溶解冻干的RAA试剂。 最后，进行等温扩增和荧光检测以进行细菌定量。 在具有独特功能室和多级虹吸通道的离心盘中精心实现了细菌磁力分离、核酸提取和荧光RAA检测。 开发了一种支持设备来自动连续执行编程的离心协议，包括用于等温扩增的温度控制和用于实时 RAA 分析的荧光检测。 在最佳条件下，该离心系统能够在 1 小时内检测出加标鸡肉样品中低至 10 CFU mL−1 的沙门氏菌，平均回收率为 105.6%，平均标准偏差为 8.4%。 它已被证明是快速检测沙门氏菌的替代方法。

3.A Lab-on-a-Tube Biosensor Combining Recombinase-Aided Amplification and CRISPR-Cas12a with Rotated Magnetic Extraction for Salmonella Detection

食源性致病菌威胁着全球公共卫生，迫切需要简单的细菌检测方法。在这里，我们建立了一种实验室管生物传感器，用于简单，快速，灵敏和特异性检测食源性细菌。方法：使用可旋转的Halbach圆筒磁铁和带有磁性二氧化硅珠（MSB）的铁丝网，从目标细菌中简单有效地提取和纯化DNA，重组酶辅助扩增（RAA）与聚集的规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白12a（CRISPR-Cas12a）结合，扩增DNA并产生荧光信号。首先，将15 mL细菌样品离心，并用蛋白酶裂解细菌沉淀以释放靶DNA。然后，当管相互旋转并均匀分布在Halbach圆筒磁铁内部的铁丝网上时，形成DNA-MSB复合物。最后，使用RAA扩增纯化的DNA，并通过CRISPR-Cas12a测定法定量检测。结果：该生物传感器可以在75分钟内定量检测加标牛奶样品中的沙门氏菌，检测下限为6 CFU/mL。102 CFU/mL鼠伤寒沙门氏菌的荧光信号超过2000 RFU，而104 CFU/mL单核细胞增生李斯特菌，蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌O157:H7被选为非靶细菌，信号小于500 RFU（与阴性对照相同）。结论：这种管上实验室生物传感器将细胞裂解，DNA提取和RAA扩增集成在一个15 mL管中，简化了操作并避免了污染，使其适用于低浓度沙门氏菌的检测。

4.3D active stabilization for single-molecule imaging

任何超分辨率技术的关键部分都涉及在采集过程中准确校正样本的机械运动和设置。 如果不进行校正，漂移会降低最终重建图像的分辨率，并可能引入不需要的伪影。 在这里，我们描述如何实现主动稳定，从而将所有三个维度上的漂移减少到约 1 nm。 在这个协议中，我们展示了如何在定制和标准显微镜硬件上实现我们的方法。 我们详细介绍了单独的照明和检测路径的构造，专门用于获取沉积在成像幻灯片上的基准点的衍射图案。 我们还展示了如何以任意纳米步长增量锁定焦点和调整焦点。 我们的实时焦点锁定基于使用图形处理单元执行的 kHz 计算。 快速计算允许快速重新定位样本，从而减少低于光子限制定位精度的漂移。 我们的方法可以实现无运动伪影的单分子和 或超分辨率图像采集，并且无需复杂的算法或硬件安装。 该方法对于持续数小时或数天的长时间采集也很有用，例如多色超分辨率。 安装不需要专业知识，可以在标准生物实验室中实施。 完整的协议可以在大约 2 周内实施。