Cy3.5 (Cyanine 3.5) 是一种发红色荧光的花青素类荧光染料。Cy3.5在显影时可以用561nm或者594nm的激光束激发然后用 Texas Red® 相似的滤片观察,它是一种非常常用的标记染料。Cy3.5-NHS可以用来标记蛋白,抗体,多肽,核酸分子,纳米粒等。
Cy3.5-伯胺的水溶性较低,所以在水相的标记反应体系内需要使用有机共溶剂,常用有机溶剂包括DMF,DMSO和乙腈等。如需标记的分子对有机溶剂敏感,可选择磺化花青素(sulfonated cyanine),即磺化-Cy3.5-伯胺( D10031 )。两者的光谱性质几乎一致,因此大部分应用可相互替换。两者的主要区别在于:磺化染料是水溶性的,在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂,并且降低染料在水中聚集的可能性,增强标记效率。
注意事项
Cy3.5-伯胺水溶性较低,标记反应可在有机溶剂中进行或者含有机助溶剂的水相中进行。
标记时使用不含氨基的缓冲体系,比如磷酸钠缓冲液(PBS),Hepes缓冲液,碳酸氢钠缓冲液;或硼酸缓冲液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的缓冲液,比如Tris,甘氨酸等,它们会和Cy3.5上的伯胺竞争。高浓度咪唑(imidazole)也会影响反应。
标记反应不要放在强光下,因为大部分荧光化合物在强光下长时间照射会缓慢光漂泊(photobleaching)。
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以上来自小编分享zyl2022.6.14