实习报告

一、   除了离心还有什么办法可以分离全血中的红细胞

外周血中除红细胞外，还有粒细胞、单核细胞和淋巴细胞及血小板等，通常是分离这些血细胞的重要来源。其分离方法有四种：自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分离法、Ficoll分离法。

1、自然沉降法：

将无菌抗凝血放入试管中，在37℃水浴中静置，自然沉降1-2h，可见到红细胞下沉，并有明显分层，上层血浆中富含有大量的粒细胞和淋巴细胞，下层主要为红细胞。此方法简便但各层中的细胞种类多，不纯。血浆中虽以粒细胞、淋巴细胞为主，但也含有血小板，大单核细胞和少量红细胞。下层虽以红细胞为主，但也有上述各种细胞，此法适用于淋巴细胞转化试验。

2、差异沉降法：

用6%的右旋糖酐或3%的明胶溶液无菌消毒后，分装于中试管中，由于这些物质能使红细胞形成“串状”，比粒细胞、淋巴细胞沉降速度快，因而可使红细胞与白细胞、淋巴细胞分离开。其方法如下：用6%的右旋糖酐溶液5-10ml，经抗凝血5ml加入上层中混合后静置于37℃水浴中30-60min，即可见红细胞下沉，上层富含大量粒细胞和淋巴细胞，下层为红细胞，使两者易于分离开，取上层可用于粒细胞、淋巴细胞培养和实验，下层可用于红细胞培养和实验，经PBS洗3次后即可加入培养基培养，可用于天然白细胞干扰素的诱生和生产。此法分离的细胞纯度也不高。

3、氯化铵分离法：

0.83%氯化铵（NH4CL）可使红细胞破裂，通常将分离获得的粒细胞。淋巴细胞中混有的少量的红细胞用0.83%氯化铵进行裂解，以排除红细胞的干扰。另外，此法也适合大量粒细胞、淋巴细胞的分离制备，在天然白细胞干扰素诱生和生产中已被广泛应用。方法如下：将中心血站供应的健康人外周血离心分离白细胞黄层悬液先经2000r/min离心20min，吸出上清血浆，将下层的红细胞、白细胞混合后，加入0.83 氯化铵，用量为血细胞悬液液量的3倍，于4℃作用20min后离心弃去上清。 在沉淀层中再加入新鲜0.83氯化铵混匀后于4℃作用20min，以便彻底清除红细胞，离心弃上清。收货下层的细胞用PBS洗3次后，再用含5%人AB型血清的（含100U/ml卡拉霉素）培养基制成悬液，调整细胞浓度为（8-10）x10^9个/L，分瓶加塞在 37℃普通培养箱中旋转培养（12r/h）。混悬细胞时若加入干扰素诱导剂（NDV-F）诱导22h，收货上清就可生产白细胞干扰素。此法分离的细胞纯度更差。

4、Ficoll分离法：

采用Ficoll和泛影葡胺配制而成的淋巴细胞分离液，通过2000r/min离心后可使血细胞以不同相对密度分离开，如分离淋巴细胞可选用相对密度1.077的分离液；若分离血小板可用相对密度1.090的分离液，若分离骨髓中的单核细胞常用相对密度1.120的分离液，现以淋巴细胞分离为例，方法如下。 取中心血站供应的抗凝血细胞或初步分离的白细胞黄层细胞悬液，用无钙、镁离子的PBS稀释3-4倍。将Ficoll淋巴细胞分离液事先分装于离心管中，使其沉于管底，并在37℃中预热。用吸管将经稀释的血细胞悬液沿离心管壁缓慢加入，不让细胞悬液冲破分层液界面，使其悬于分层液上方。以2000r/min离心20min后，不同细胞可依相对密度不同而分布于各位置上，由于红细胞在Ficoll作用下成串下沉，故在离心管中分布在Ficoll层下方，淋巴细胞分布在Ficoll层上方。收集浑浊带分离获得的淋巴细胞，用无钙、镁离子的PBS洗3次后，再用培养基洗1次后计数，分瓶培养。此法分离获得淋巴细胞纯度高。分离液的制备：9% Ficoll（20℃下相对密度约1.020）24份与33.4%泛影葡胺（用泛影钠或Conray400也可，在20℃下相对密度约1.200）10份混合后，将其相对密度调至1.077金额可获得淋巴细胞分离液，于121℃高压蒸汽灭菌30min，室温保存备用。若配制高相对密度的分离液用加入高浓度 泛影葡胺来调整，若配制低相对密度的分离液用稀释的Ficoll来调整。

二、为什么医院不能给病人输全血

全血是采血后立即与抗凝保存液混匀，放入4度冰箱保存的血液。全血在发达国家已很少使用。全血中除红细胞外，其余成分浓度低，有的已丧失功能或活性，起不到治疗作用。全血中主要有效成分是红细胞，其疗效与红细胞相似，而不良反应却比红细胞多。成分输血是用物理或化学的方法，将血液中各种有效成分分离出来，制成高浓度、高纯度的血液制品，根据病情，需要什么血液成分就输注什么血液成分。成分输血最主要的优点是浓度高、针对性强、疗效高，可以避免输注不需要的血液成分可能带来的不良反应和并发症。成分输血是现代输血的方向，是输血现代化的标志之一。

成份输血与输全血相比有以下优点：(1)纯度高，疗效好。血液通过提纯得到高浓度、高效价、容量少、疗效高的有关成份。例如：每立方毫米全血中含血小板10—30万，对ml小板减少引起的出血至少需输入3000ml新鲜血，才能使血小仍提高到1L—血所需水平。而成份输血可使这3000ml全血中的血小板浓缩到300—350m1血小板浓缩液中，就能起到止血的效果。同时这3000ml全血中的其它成份可用于其它病人。(2)输用安全，副反应少。成份血有效成分浓度高，其它成份少，因此可减少由于输注全血而发生的过敏反应等的可能性。(3)稳定性好，便于保存和运输。(4)综合利用节约用血。提高了血液的利用价值。

三、用血是否安全

血液筛查

世卫组织建议在使用前筛查所有献血，以防感染。应强制筛查艾滋病毒、乙型肝炎、丙型肝炎和梅毒。应当根据质量系统的要求开展血液筛查。

血液处理

采集的血液经抗凝处理后可以完整储存并向患者输注。这称为输注“全血”。若将其处理为红细胞浓缩液、血小板浓缩液、血浆和低温沉淀物等成分，可更有效地使用血液。这样一来，可满足一名以上患者的需求。

血浆源医药产品的供应

世界卫生大会决议（WHA63.12号）敦促所有会员国根据可用资源情况，制定、实施和支持全国协调的、有效管理和可持久的血液和血浆规划，以便做到自给自足。各自国家政府有责任确保平等、充分供应血浆源医药产品，即免疫球蛋白和凝血因子，它们在预防和治疗世界各地发生的各种严重疾病方面必不可少。

临床用血

不必要输血和不安全输血做法使患者面临出现严重输血不良反应和输血感染的风险。不必要输血还减少了可供需要输血患者使用的血液制品的可得性。

世卫组织建议设立医院输血委员会和血液警戒等系统来监督和提高输血程序的安全性。111个国家制定了全国性临床适当用血指南。

确立具有组织良好和协调一致的输血服务的国家血液系统，以证据为基础并合乎伦理的有效国家血液政策以便实现自给自足，以及确保向所有需要输血的患者及时提供足够的安全血液和血液制品的立法和规定。通过加强献血系统、逐步减少家庭/替代献血、取消有偿献血以及有效地管理献血者（包括关怀和咨询），从低风险人群的自愿无偿定期献血者中采集血液、血浆及其它血液成分。对采集的所有血液开展有质量保证的筛查以便发现可通过输血传播的感染（包括艾滋病毒、乙肝、丙肝和梅毒），对感染标志物筛查阳性的所有献血者的化验结果进行确认检测，鉴定血型，进行配合性试验，并酌情形成把血液加工成血液制品（输血用血液成分以及血浆源医药产品）的系统，以便满足卫生保健需求。合理使用血液和血液制品，减少不必要的输血，尽量减少与输血相关的风险，在可能情况下使用其它方法替代输血，并采用安全和良好的临床输血措施，包括病人血液管理。 逐步实施有效的质量系统，包括质量管理、标准、生产操作规范、文献、对所有人员的培训以及质量评估。

世卫组织通过其输血安全规划，支持各国发展国家血液服务系统，确保及时获得足够且安全的血液和血液制品，并发展良好输血服务，满足患者需求。该规划向国家提供政策指导和技术援助，确保普遍获得安全血液和血液制品，并以自愿无偿献血为基础，努力做到安全血液和血液制品的自给自足，实现全民健康覆盖。