描述:
将辣根过氧化物酶(HRP)标记到转铁蛋白上是一种常用的方法,用于生物分析和免疫检测。标记后的HRP-转铁蛋白可以用于检测铁蛋白在生物样品中的存在和水平。以下是标记HRP到转铁蛋白的一般步骤:
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准备转铁蛋白溶液:将转铁蛋白溶解在磷酸盐缓冲液(PBS)中,确保其浓度在1-10 mg/mL之间。
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激活HRP:将HRP与NHS和EDC混合,在室温下反应一段时间,以激活HRP。
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将激活的HRP加入转铁蛋白溶液中:将激活的HRP缓慢加入到转铁蛋白溶液中,并轻轻混合。
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反应:在室温下或4°C下孵育1-2小时,期间轻轻搅拌,促进HRP与转铁蛋白的结合。
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去除未反应的HRP:使用透析袋或凝胶过滤柱去除未反应的HRP。
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纯度和活性检测:检测标记后的HRP-转铁蛋白的纯度和活性,确保其可以用于后续实验。
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应用和保存:标记后的HRP-转铁蛋白可用于免疫分析和生物学研究中。存储时应避光、冷藏保存,以保持其稳定性和活性。
这种方法可以用于研究铁蛋白在细胞和组织中的分布和功能,以及铁代谢相关疾病的诊断和*方法的开发。
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