描述:
吲哚菁绿(ICG)是一种常用的荧光染料,可以用于标记蛋白质以进行生物分析和细胞成像等研究。以下是将ICG修饰到人转铁蛋白上的一般步骤:
材料准备
- 人转铁蛋白:*的人转铁蛋白,确保其纯度和活性。
- 吲哚菁绿(ICG):购买高纯度的ICG荧光染料。
- 碳酸氢钠缓冲液:用于制备标记反应的缓冲液。
- 其他试剂和耗材:如甲醛、透析袋、离心管等。
标记步骤
- 准备转铁蛋白溶液:将转铁蛋白溶解在碳酸氢钠缓冲液中,确保其浓度适合标记反应。
- 制备ICG溶液:将ICG溶解在适量的溶剂中,制备成适当浓度的溶液。
- 标记反应:将适量的ICG溶液缓慢加入到转铁蛋白溶液中,同时轻轻搅拌。
- 加入甲醛固定:加入适量的甲醛固定反应,使ICG与转铁蛋白结合。
- 孵育:在室温下孵育一段时间,通常为1-2小时,以促进ICG与转铁蛋白的结合。
- 去除未反应的ICG:使用透析袋或凝胶过滤柱去除未反应的ICG。
- 纯度和活性检测:检测标记后的ICG-转铁蛋白的纯度和活性,确保其可以用于后续实验。
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