链霉亲和素-巯基 Streptavidin-thiol

链霉亲和素-巯基           Streptavidin-thiol     

描述：

链霉亲和素-巯基（Streptavidin-Thiol）是一种经过化学修饰的链霉亲和素，用于生物研究和诊断中的生物素-链霉亲和素系统。链霉亲和素是一种高亲和力的生物素结合蛋白，通过在其分子结构上引入巯基（-SH）功能团，使其能够进一步与其他分子或表面进行共价连接，特别是通过硫醇-金键合或与马来酰亚胺等反应。

制备链霉亲和素-巯基的步骤：

1. 材料准备：

   • 链霉亲和素（Streptavidin）
   • 巯基修饰试剂（如N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯，SPDP）
   • 缓冲液（如PBS）
   • 去离子水

2. 链霉亲和素的溶解：

   • 在PBS缓冲液中溶解链霉亲和素，配制适当浓度。

3. 巯基修饰：

   • 将SPDP溶解在适量的DMSO中，制备一个高浓度的修饰试剂溶液。
   • 将SPDP溶液缓慢加入链霉亲和素溶液中，维持反应体系的pH值在7.5左右。
   • 室温下反应1-2小时，SPDP的NHS部分与链霉亲和素上的氨基反应，形成二硫键。

4. 巯基引入：

   • 向反应混合物中加入DTT（DL-二硫苏糖醇）或TCEP（三(2-羧乙基)膦）等还原剂，断开二硫键，释放出巯基（-SH）。
   • 反应在室温下进行1小时。

5. 纯化：

   • 通过透析或凝胶过滤去除未反应的修饰试剂和还原剂，得到纯化的链霉亲和素-巯基。

6. 储存：

   • 将纯化后的链霉亲和素-巯基溶液分装，低温保存（如4°C或-20°C），防止巯基氧化。

应用：

链霉亲和素-巯基在生物研究中具有广泛的应用，主要用于：

1. 表面修饰： 可用于修饰金纳米颗粒、电极、微孔板等，通过巯基与金等表面形成稳定的共价键。
2. 共价连接： 与其他含有马来酰亚胺或其他巯基反应性基团的分子共价连接，用于构建复杂的生物传感器和诊断试剂。
3. 生物素检测：*结合生物素标记的分子，如抗体、核酸、蛋白质等，广泛应用于免疫分析、分子生物学实验和细胞成像等领域。

链霉亲和素-巯基的高特异性和高亲和力使其成为研究和诊断中的重要工具。

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