摘要：
目的: 1,设计一种新型的小肽RWR. 2,观测RWR对血小板聚集及血栓形成的影响. 3,探索RWR通过αIIbβ3抑制血栓形成的机理. 4,验证RWR的抗栓效果,为含RGD抗栓药物的研发提供理论依据. 方法: 1,RWR小肽的设计与合成 利用Fmoc固相法合成化学方法合成RWR,在RGD基础上,增加一个疏水性氨基酸和一个碱性氨基酸,序列特征为Arg-Gly-Asp-Trp- Arg,蛋白质一级结构为RGDWR,课题组将这种新的化合物命名为RWR,该小肽具有RGD结构,理论上具备通过血小板表面整合素αIIbβ3受体从而 与血小板特异结合的能力. 2,RWR对血小板聚集的影响的体外量效关系 利用血小板聚集仪检测不同浓度RWR对血小板最大聚集率的 影响.将家兔全血分离为PRP和PPP,用PPP校零后,在PRP管中加入相同剂量的血小板聚集诱导剂ADPNa2,再加入不同浓度的RWR,检测 5min内的血小板最大聚集率.用同样的方法检测RWR对人血小板聚集率的影响. 3,RWR与替罗非班(tirofiban),阿司匹林(aspirin)等传统药物相比较,作用于家兔血小板聚集率 分别用不同浓度的替罗非班和阿司匹林作用于体外分离出的血小板,计算出两者的半数有效抑制浓度(IC50),与我们合成的RWR药物的IC50相比较,观察RWR的作用强弱. 4,RWR对血小板聚集率影响的体内时效关系 给药前心脏取血测量血小板聚最大集率,将RWR耳缘静脉注射后,0h,0.25h,0.75h,1h,2h分别心脏取血,分别测量血小板最大聚集率.观察RWR在体内的代谢时长以及其作用时效. 5,RWR对血栓形成的影响 利用家兔动静脉血栓旁路循环模型和大鼠三氯化铁血栓模型研究RWR对血栓形成的影响.两种模型分别通过血栓重量和血栓内部结构变化分析RWR的作用效果. 6,RWR对血液中cGMP含量的影响 通过酶联免疫试剂盒来测定血液中cGMP的含量,了解血栓的变化,反映RWR的作用效果. 结果: 1,质谱分析证实RWR序列正确,高效液相色谱提示RWR的纯度97.06%. 2,血小板聚集实验显示随着RWR的浓度增大,血小板最大聚集率逐渐降低.RWR较阿司匹林,替罗非班抗血小板聚集活性强.且与家兔血小板相比较,RWR对人血小板聚集率作用效果更显著. 3,兔子动静脉旁路循环实验表明,随着RWR浓度的增大,血栓重量逐渐减小且其作用较替罗非班强.大鼠三氯化铁血栓模型显示随着RWR的浓度增大,血管内的腔隙变小. 4,随着给药浓度RWR的上升,血浆中cGMP的含量逐渐增大. 结论: 1,合成全新小肽RWR,结构与设计相符. 2,血小板聚集实验证实RWR在体内外均具有明显抑制血小板聚集的特性,且与传统抗栓药物阿司匹林和替罗非班相比,RWR抗血小板聚集效果更强. 3,两种血栓模型实验证实RWR可以抑制血栓形成,且其对血栓重量的影响较替罗非班强,血浆中cGMP含量增大,验证了RWR抗血栓的效果.
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