光谱 波长_在线近红外光谱仪器原理和技术特点(一)

自从第一台近红外光谱仪器问世以来，随着科学技术的发展，特别是材料科学和电子计算机科学的进步，新型的光学和电子元器件层出不穷，高性能电子计算机日新月异，推动了光谱仪器从性能到功能，从实验室大型台式仪器到微小型便携式仪器，从离线仪器到在线仪器的迅速拓展延伸。 经典的实验室检测方式，已经远远不能满足工农业生产实际的不同应用场景的需要，微小型便携式近红外光谱仪器，具备在线检测能力的近红外光谱仪器的研发和应用推广已经被提到议事日程，目前微小型便携近红外光谱仪器的工作原理多种多样，不同类型的仪器有着各自的技术特点，当然对不同的应用场景选择对应的近红外光谱仪器也不相同，对于近红外光谱分析技术研究和应用的工程人员如何选型是首先遇到的问题。 一、近红外光谱仪器的基本性能指标 1. 仪器的波长范围 仪器的波长范围是指近红外光谱仪器有效的光谱工作范围，光谱范围主要取决于仪器 的光路设计、探测器的类型以及光源。近红外光谱仪器的波长范围通常分两段，700 ～1 100 nm的短波近红外光谱区域和1 100 ～ 2 500 nm的长波近红外光谱区域。 选择工作波长要根据具体检测对象的指标需要而定，一般的原则是根据检测对象的指标出现最大或较大信息的波长范围为工作波长，仪器的波长范围往往决定着近红外光谱仪器的价格，在不考虑其他因素的情况下，700 ～1 100 nm短波近红外仪器的价格要便宜得多，1 000 ~1 700 nm的(中波)近红外的价格就要高得多，1 700 ~ 2 500 nm的长波近红外光谱仪器的价 格还要稿，这主要原因是探测器的基础材料不一样的，短波近红外光谱仪器使用硅基(Si)的探测器，而中波和长波近红外光谱仪器主要使用銦镓砷(InGaAs)探测器，1 700 nm以上的长波近红外光谱仪器也使用銦镓砷探测器，但还需要采用一些附加措施才能使探测器能有效工作，这里最主要的措施之一是使探测器正在低温下工作，常采用二级电制冷的方案。 2. 仪器光谱分辨率 仪器的光谱分辨率是指仪器区分两个相邻吸收峰能力的量度，通常由光谱带宽来表征，即经分光系统分成的单色光谱带最大强度一半处的宽度。 光谱分辨率主要取决于光谱仪器的分光系统，对用多通道 检测器 的仪器，还与探测器的像素点之间的物理距离和像素点的数目有关。分光系统分光后的光谱带宽越窄，其分辨率越高，对光栅分光仪器而言，分辨率的大小还与 狭缝 的设计有关。 仪器的分辨率能否满足要求，要看仪器分析的对象，即分辨率的大小能否满足样品信息的提取要求。有些化合物的结构特征比较接近，要得到准确的分析结果，就要对仪器的分辨率提出较高的要求，例如 二甲苯 异构体的分析，一般要求仪器的分辨率好于1 nm。 选择光谱分辨率还需要从另一个角度考虑，对于一般的定量分析的应用，如果是单机建立定量校正模型，由于混合物的近红外吸收光谱基本不会出现太突出的峰和谷，通常呈现出俗称为“馒头峰”的缓慢变化信息，故分辨率不是一个要求非常高的指标；如果需要校正模型能在不同仪器之间的共享，仪器的分辨率将变成重要的指标之一，也就是仪器光谱分辨率越高，为后续的模型共享(转移)的算法创造的条件就越好，模型转移的效果也就越好，当然仪器的分辨率越高价格也随之升高。 3. 波长准确度 光谱仪器波长准确度是指仪器测定标准物质某一特征谱峰的波长与该谱峰的标定波长之差。波长的准确性对保证近红外光谱仪器间的模型传递非常重要。为了保证仪器间校正模型的有效传递，波长的准确性在短波近红外范围要求好于0.5 nm，长波近红外范围好于1.5 nm。 目前有许多仪器内置了标准物质，通过不断动态检测标准物质的标定波长修正仪器显示波长的准确度，这样可以保证在仪器工作时的波长准确度基本保持不变，有效提高了仪器之间的波长一致性。 4. 波长 重现性 仪器波长的重现性指对 样品 进行多次扫描，谱峰位置间的差异，通常用多次测量某个谱峰位置的波长或波数的 标准偏差 表示。波长重现性是体现仪器波稳定性的一个重要指标，也是仪器定性和定量分析时分析结果准确性和重现性的保证。一般要求仪器波长的 重现性 应好于0.1 nm。 对于移动光栅型光谱仪器，波长的重现性取决于多次扫描时，光栅能否回到同样的位置的精度，对于有些类型的光谱仪器，波长的重现性往往还会受到环境温度和仪器温度的影响，由于温度的变化引起仪器分光系统的规律性的变化而影响到分光效果的稳定性。 5. 吸光度准确性 吸光度准确性是指仪器对某 标准物质 进行透射或漫反射测量，测量的吸光度值与该物质标定值之差。对那些直接用吸光度值进行定量的近红外方法，吸光度的准确性不但直接影响测定结果的准确性，还会对校正模型在各台仪器之间的转移效果造成较大的影响。 6. 吸光度重现性 吸光度重现性指在同一背景下对同一 样品 进行多次扫描，各波长点处的吸光度之 间的差异。通常用多次测量某一谱峰位置所得吸光度的标准偏差 表示。吸光度重现性对近红外检测来说是一个很重要的指标，它直接影响模型建立的效果和测量的准确性。一般吸光度重现性应 在0.001～0.000 4 A之间。 吸光度的重现性是保证分析精度的基本条件，虽然后续有些光谱预处理方法可以部分降低不产生畸变的吸光度重现性误差(如工作波长上平移误差或等比例的误差等)对分析精度的影响，但是要安全消除是不可能的。 7.光谱信噪比 光谱信噪比是指在一定的波长范围内对同一 样品 进行两次检测，两次检测的光谱相除后乘100%，即得到了常说的100% τ，对100% τ进行适当的统计计算得出仪器的光谱信噪比，光谱信噪比是体现仪器稳定性的重 要指标之一。光谱仪器的信噪比计算有多种方法，其中峰-峰(F-F)值和均方根(RMS)值是最常用的计算方法。 仪器信噪比可以分成0%τ信噪比和100%τ信噪比， 其中0%τ信噪比是指透过率为零(即基本不透过状态)时的信噪比，此时的信噪比实质上就是仪器的无光时的静噪声，它决定着仪器的最低检测能力，也就是说，只有待测物质的光谱信号大于仪器无光时的静噪声才有可能被仪器检测到信号；100%τ信噪比决定着仪器正常工作时的最大光谱信号的分辨能力，只有当待测物质的光谱信号变化大于100%τ时的噪声信号强度才能被仪器分辨出来。 信噪比的选择与仪器的价格是息息相关的，实际使用时应该根据待测物质的最低含量和检测精度的要求选择适合的信噪比。 8. 吸光度范围 吸光度范围也称光谱仪的动态范围，是指仪器测定可用的最高吸光度与最低能检测到的最低吸光度之比。该指标取决于探测器的工作范围和仪器中的信号放大电路的工作范围，吸光度范围越大，可用于检测样品的 线性 范围也越大。 9. 扫描速度 扫描速度是指在规定的扫描波长范围内完成1次扫描所需要的时间。不同分光原理仪器完成1次扫描所需的时间有很大的差别。例如， 电荷耦合器件 (CCD或PAD)多通道近红外光谱仪器完成1次扫描最快只要 2~5 ms，速度非常快；一般傅立叶变换仪器的扫描速度在1次/s左右；传统的光栅扫描型仪器的扫描速度相对较慢，扫1张完整的光谱基本在“分”级的水平。 光谱仪器的扫描速度不但与仪器的分光原理有关，常常还与扫描波长范围，数据采样间隔有关，一般情况下，扫描波长范围小、数据采样点少完成1次扫描的时间就短，扫描速度就快，反之扫描速度就低。 扫描速度的选择需要考虑到检测需要的时间，对于需要动态检测场合，特别是在线、原位检测的场合该指标或许是第一位需要考虑的重要指标。在线检测时，由于待测物料是移动的，此时的扫描速度必须要与物料的移动速度相匹配，如果扫描速度过慢，得到的光谱就不是物料某个检测光斑内的信息；对于原位检测扫描速度更为重要，特别是检测高速反应的化学合成或分解过程，没有极高的扫描速度是不可能捕捉到有效的光谱变化信息。 10. 数据 采样间隔 采样间隔 是指连续记录的两个光谱信号间的 波长 差。值得注意的是：数据采样间隔与仪器的光谱分辨率不是一回事，更不能使用数据采样间隔替代仪器的光谱分辨率。 数据采样间隔越小，样品信息越丰富，要获得和表征一个完整的光谱变化信息(峰或谷)，最少需要采集3个数据点，也就是说起码要能采到光谱变化前、中、后，才能有效表征光谱变化的状态。数据采样间隔越小，得到的光谱越光滑，越有利于校正模型的转移，但需要的光谱信息存储空间也越大，扫描速度有可能也会变慢；数据采样间隔过大则，光谱变得粗糙，样品的有些细小信息可能未捕捉到。选择既能保证光谱信息满足实际检测的需要，又能保证一定的扫描速度要求，需要经过仔细的理论分析和试验验证才能决定。 11.温度漂移 近红外光谱仪器在工作时极易受到环境温度、仪器内部温度和样品温度的影响，虽然大多数近红外光谱仪并没有明确的温度漂移对各参数影响的强制性要求，但对使用者而言，温度的影响是绕不过的问题。对于实验室仪器，因在较好的环境下工作，环境温度可以严格控制，仪器的温度可以通过长时间预热仪器内部温度达到平衡后开始工作，样品的温度可以采用集中摆放，等所有样品达到同样的温度后集中采集光谱。但对小型和微型便携式仪器的现场检测或在线检测的工作的环境难以主管控制，且常常要求快速进行样品的检测，仪器的温度和样品的温度难以控制，故在选择仪器时必须要考虑温度对检测效果的影响。目前有些近红外光谱仪器内部配置有恒温装置(TEC恒温控制系统)，大多数微小型近红外光谱仪器可以选配恒温控制系统，这样就能保证仪器工作是不受到或少受到环境温度和仪器内部温度变化的影响，保证仪器始终在能在温度不变的条件下工作。 -------------------------------------- 陈斌教授 江苏大学食品与生物工程学 中国仪器仪表学会食品质量安全检测仪器与应用技术分会副理事长，近红外分会常务理事，中国仪器仪表学会分析仪器分会理事。江苏大学食品学院